尤其是，本披露提供了用于治療亨廷頓病(huntington’sdisease)的技術。在一些實施例中，本文提供了施用wve-003以在有需要的人類受試者中改善亨廷頓病、減少mhttrna、或減少mhtt蛋白的方法。在某些情況下，方法可用于改善亨廷頓病的至少一種癥狀。亨廷頓病的這樣的癥狀包括但不限于腦萎縮、肌肉萎縮、神經變性、不受控運動、吞咽困難、說話困難、焦慮和抑郁。
背景技術：
1、寡核苷酸可用于治療、診斷、研究和納米材料應用。天然存在的核酸(例如，未經修飾的dna或rna)用于治療的用途可能受限，例如，因為天然存在的核酸對細胞外和細胞內核酸酶的不穩定性和/或天然存在的核酸的細胞滲透和分布不良。目前缺乏用于治療神經退行性疾病，如亨廷頓病的可接受選擇。本文的目的是提供用于治療這樣的疾病的方法。
技術實現思路
1、wve-003(也可以稱為wv-21405)具有以下結構：mg*smun001r?mu?mgn001r?ma*st*sc*st*sg*st*ra*sg*sc*sa*sg*r?m5ceon001raeogeon001r?m5ceo*steo，其中：
2、m代表對核苷的2’-ome修飾；
3、*s代表sp硫代磷酸酯鍵聯；
4、m5ceo代表5-甲基2'-o-甲氧基乙基c；
5、n001r代表rp?n001鍵聯，其中n001鍵聯具有的結構；
6、eo代表對核苷的2’-och2ch2och3修飾；并且
7、*r代表rp硫代磷酸酯鍵聯。
8、如在寡核苷酸描述中典型地使用的，如果沒有特別指示，則核苷是dna核苷并且鍵聯是天然磷酸酯鍵聯。
9、如本文所述，wve-003可以以各種形式提供，包括藥學上可接受的鹽形式，諸如鈉鹽。
10、尤其是，本披露涵蓋以下認識：htt(亨廷頓蛋白)寡核苷酸的結構元件，諸如堿基序列、化學修飾(例如，糖、堿基和/或核苷酸間鍵聯的修飾及其模式)、和/或立體化學[例如，骨架手性中心(手性核苷酸間鍵聯)的立體化學和/或其模式]可以對htt寡核苷酸特性和/或活性(例如，蛋白質結合特征、穩定性、毒性、遞送、htt轉錄物的等位基因特異性敲低等)具有顯著影響。在一些實施例中，本披露證明了具有受控結構元件的htt寡核苷酸及其組合物可以提供出乎意料的治療特性和活性。在一些實施例中，本披露提供了可用于治療受試者的亨廷頓病的技術，例如htt寡核苷酸、藥物組合物、藥物產品、劑量、給藥等，特別是wve-003的那些。在一些實施例中，受試者具有包含擴增的cag重復區并且與wve-003的堿基序列完全互補的htt等位基因或轉錄物。如本文所用，如果核酸或堿基序列包含與另一個核酸或堿基序列具有相同長度并且與另一個核酸(例如，wve-003)或堿基序列的完全堿基序列完全互補的序列，則該核酸或堿基序列可以被認為與另一個核酸(例如，wve-003)或堿基序列完全互補。在一些實施例中，擴增的cag重復包含36個或更多個cag重復。在一些實施例中，受試者包含與亨廷頓病相關聯的htt轉錄物，其中該轉錄物與wve-003的堿基序列完全互補。在一些實施例中，受試者包含與亨廷頓病相關聯的htt轉錄物，其中該轉錄物與wve-003在snp?rs362273處的堿基序列完全互補。在一些實施例中，受試者包含與wve-003的堿基序列完全互補并且包含擴增的cag重復區的htt轉錄物。在一些實施例中，受試者包含與wve-003在snp?rs362273處的堿基序列完全互補并且包含擴增的cag重復區的htt轉錄物。在一些實施例中，受試者包含htt核酸，例如htt基因，其編碼與亨廷頓病相關聯的htt轉錄物，其中該轉錄物與wve-003的堿基序列完全互補。在一些實施例中，受試者包含htt核酸，例如htt基因，其編碼與亨廷頓病相關聯的htt轉錄物，其中該轉錄物與wve-003在snprs362273處的堿基序列完全互補。在一些實施例中，受試者包含htt核酸，例如htt基因，其編碼與wve-003的堿基序列完全互補并且包含擴增的cag重復區的htt轉錄物。在一些實施例中，受試者包含htt核酸，例如htt基因，其編碼與wve-003在snp?rs362273處的堿基序列完全互補并且包含擴增的cag重復區的htt轉錄物。在一些實施例中，受試者具有snprs362273的a變體。如本領域技術人員所理解的，具有snp?rs362273的a變體的htt轉錄物可以與wve-003的堿基序列完全互補，其中該a與wve-003中的t互補。在一些實施例中，snprs362273的a變體與htt中擴增的cag重復區在同一條染色體上。在一些實施例中，受試者具有不是a的snp?rs362273的變體。在一些實施例中，不是a的snp?rs362273的變體與htt中擴增的cag重復區不在同一條染色體上。在一些實施例中，snp?rs362273的變體是c。在一些實施例中，受試者對于snp?rs362273的a變體是雜合的。在一些實施例中，受試者對于snprs362273的a變體是雜合的，其中該a變體與htt中擴增的cag重復區在同一條染色體上。在一些實施例中，受試者對于snp?rs362273的a變體是純合的。在一些實施例中，受試者對于snp?rs362273的a變體是純合的，并且具有htt中的擴增的cag重復區。在一些實施例中，受試者的一個染色體具有htt中的擴增的cag重復區。在一些實施例中，受試者的兩個染色體獨立地具有htt中的擴增的cag重復區。
11、在一些實施例中，亨廷頓病(hd)是一種使人衰弱且最終致命的常染色體顯性神經障礙，其特征在于認知衰退、精神疾病和舞蹈癥。在一些實施例中，hd致使腦中的神經細胞隨時間推移而惡化，從而影響思考能力、情緒和運動。據報道，hd是由亨廷頓蛋白(htt)基因中擴增的胞嘧啶-腺嘌呤-鳥嘌呤(cag)三聯體重復引起的，這導致突變型htt蛋白的產生。在一些實施例中，突變型htt的積累導致腦中神經元的逐漸喪失。在一些實施例中，野生型或健康htt蛋白對于神經元功能至關重要，而抑制可能具有有害的長期后果。在一些實施例中，美國大約30,000人患有癥狀性hd，另有超過200,000人具有遺傳該疾病的風險。目前沒有被批準的可用的疾病修正療法。
12、在一些實施例中，據報道，亨廷頓病(hd)是由亨廷頓蛋白(htt)基因中的胞嘧啶-腺嘌呤-鳥嘌呤(cag)重復擴增引起的，這導致突變型htt(mhtt)蛋白產生。在一些實施例中，雖然據報道mhtt是疾病的原因，但臨床前研究表明野生型htt(wthtt)的喪失也可能導致神經元損傷。在一些實施例中，據報道，wthtt蛋白對于神經元功能是關鍵的；抑制wthtt可能具有有害的長期后果。
13、在一些實施例中，據報道，選擇性降低mhtt蛋白的產生、同時保留足夠的wthtt水平(也被描述為等位基因特異性敲低)的能力對于hd治療具有很大的希望。在一些實施例中，如本文所證實的，如本文所述的寡核苷酸施用可以在個體受試者和/或受試者群體中使mhtt轉錄物和/或蛋白質的水平、表達和/或活性降低超過wthtt轉錄物和/或蛋白質的水平、表達和/或活性。
14、在一些實施例中，等位基因特異性敲低利用單核苷酸多態性(snp)與遺傳突變之間的關聯來特異性靶向遺傳障礙(包括亨廷頓病(hd))中的錯誤。
15、在一些實施例中，本披露提供了用于等位基因特異性敲低mhtt轉錄物的寡核苷酸、組合物和方法，其中等位基因特異性敲低(也被稱為等位基因特異性抑制、等位基因選擇性方法、等位基因選擇性敲低或抑制等)相對于野生型htt和/或其產物(例如，野生型htt蛋白)優先降低mhtt轉錄物(例如，包含擴增的cag重復區)和/或其產物(例如，mhtt蛋白)的水平、表達和/或活性(例如，野生型htt的表達、水平和/或活性沒有顯著降低、沒有降低、保持相同或增加)。
16、在一些實施例中，mhtt轉錄物的水平、表達和/或活性的降低導致mhtt蛋白的水平、表達和/或活性(包括但不限于mhtt蛋白的聚集體(凝結物)的形成、數量和/或大小)的降低或與之相關聯。在一些實施例中，mhtt蛋白包含延伸的聚谷氨酰胺(poly-q)段，例如由cag重復擴增翻譯。
17、在一些實施例中，本披露是關于：一種治療和/或預防有需要的受試者(例如，患者，諸如人類患者)的亨廷頓病的方法；一種等位基因特異性敲低受試者中的突變型亨廷頓蛋白轉錄物的方法；和/或一種用于降低亨廷頓病的一種或多種癥狀的嚴重程度和/或延遲其發作的方法。在一些實施例中，該方法包括向該受試者施用治療有效量的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的步驟。在一些實施例中，本披露是關于：一種治療、改善亨廷頓病或減緩亨廷頓病的發作或進展的方法，該方法包括向受試者施用包含htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的化合物，其中該寡核苷酸與突變型亨廷頓蛋白等位基因在該等位基因上包含單核苷酸多態性(snp)位點的位置處互補，其中向該受試者施用的化合物通過選擇性減少該突變型亨廷頓蛋白等位基因來該治療、改善亨廷頓病和/或減緩亨廷頓病發作和/或進展。在一些實施例中，本披露是關于：一種改善亨廷頓病的癥狀的方法，該方法包括向有需要的人類受試者施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物。
18、在一些實施例中，htt寡核苷酸是wve-003。在一些實施例中，htt寡核苷酸組合物是包含wve-003的組合物。在一些實施例中，wve-003組合物是手性控制的寡核苷酸組合物。
19、在一些實施例中，wve-003組合物是手性控制的(例如，立體純的)htt寡核苷酸組合物，其能夠介導mhtt轉錄物的水平、表達和/或活性的等位基因特異性降低。wve-003可以選擇性地靶向htt?snp?rs362273(有時被稱為snp3)的一種同種型。wve-003與其靶向的snp序列(和周圍序列)完全互補。如本文所述，在各種實施例中，wve-003與mthtt轉錄物完全互補。在一些實施例中，wve-003與mthtt轉錄物完全互補，并且與wthtt轉錄物不完全互補。在一些實施例中，mthtt轉錄物與病癥、障礙或疾病(如亨廷頓病)相關聯或者比wthtt轉錄物更相關聯。在一些實施例中，mthtt包含36、37、38、39、40、45、50或更多個cag重復。如本領域技術人員所理解的，可以使用轉錄物由其轉錄的遺傳序列來評估與轉錄物的互補。
20、在一些實施例中，wve-003可以用作疾病修正劑，以用于治療患有亨廷頓病(hd)的受試者。它可以作為選擇性靶向亨廷頓蛋白(mhtt)基因轉錄物的突變形式的立體純反義寡核苷酸(aso)提供。在一些實施例中，wve-003的組合物是立體純的寡核苷酸組合物，其識別亨廷頓蛋白基因中snp?rs362273的疾病相關(例如，突變型)等位基因，有效降低mhtt基因(或其基因產物)的水平、表達和/或活性，并且能夠介導突變型亨廷頓蛋白(mhtt)基因的等位基因特異性敲低。
21、在一些實施例中，本披露提供了用于降低mhtt基因(或其基因產物)的水平、表達和/或活性的方法，該方法包括以如本文所述的劑量或根據劑量方案向受試者施用寡核苷酸。在一些實施例中，mhtt轉錄物的水平降低。在一些實施例中，mhtt蛋白的水平降低。在一些實施例中，wthtt基因的水平、表達和/或活性沒有顯著降低。在一些實施例中，使用來自受試者的樣品進行評估。在一些實施例中，本文的各種方法中的受試者是人類。在一些實施例中，使用來自易患或患有與突變型htt相關聯的病癥、障礙或疾病(例如，亨廷頓病)的人類受試者的樣品進行評估。在一些實施例中，使用患者樣品進行評估。“患者樣品”是來自患者的任何生物樣本。術語樣品包括但不限于生物流體，諸如血液、血清、血漿、尿液、腦脊液(cfs)、淚液、唾液、淋巴液、透析液、灌洗液、精液和/或其他液體樣品，以及生物來源的細胞和組織。在一些優選實施例中，使用csf樣品進行評估。在一些實施例中，使用血漿樣品進行評估。在一些實施例中，使用血液樣品進行評估。在一些實施例中，在如本領域技術人員所理解的一個或多個合適的時間點進行評估，例如，在施用劑量之后約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天，或約3、4、5、6、7或8周，或約3、4、5、或6個或更多個月之后，并且如果有的話在施用下一個劑量之前。在一些實施例中，在施用約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個劑量之后進行評估。在一些實施例中，評估結果是針對個體受試者。在一些實施例中，對受試者群體進行評估，例如，如典型地在臨床試驗或臨床應用中進行的。在一些實施例中，群體具有約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000或更多個受試者的大小。在一些實施例中，該大小是約10個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約20個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約36個受試者。在一些實施例中，該大小是約30個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約40個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約50個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約100個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約200個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約500個或更多個受試者。在一些實施例中，該大小是約1000個或更多個受試者。在一些實施例中，降低是約10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％或更多。在一些實施例中，降低是至少約10％或更多。在一些實施例中，降低是至少約12％或更多。在一些實施例中，降低是至少約20％或更多。在一些實施例中，降低是至少約30％或更多。在一些實施例中，降低是至少約40％或更多。在一些實施例中，降低是至少約50％或更多。如本領域技術人員所理解的，在一些實施例中，mhtt基因或其產物包含與wve-003序列相同或完全互補的序列并且含有擴增的cag重復(或由其編碼的序列)，并且野生型htt基因或其產物不含與htt中或rs362273處的wve-003序列相同或完全互補的序列并且含有更少的cag重復(例如，不認為是擴增的cag重復)(或由這些重復編碼的序列)。
22、在一些實施例中，本披露是關于與htt寡核苷酸或組合物的使用相關的各種方法中的任一種。在一些實施例中，htt寡核苷酸是wve-003。在一些實施例中，組合物是包含wve-003的組合物。在一些實施例中，組合物是wve-003組合物，并且該組合物中基本上所有的寡核苷酸都是wve-003(如本領域技術人員所理解的，一些其他寡核苷酸可以作為雜質存在，其水平可以并且典型地在所提供的組合物中被控制)。
23、在一些實施例中，htt寡核苷酸，例如wve-003或組合物以約10-200mg、約10-190mg、約10-180mg、約10-170mg、約10-160mg、約10-150mg、約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的劑量施用于或遞送至受試者。
24、如本文所用，除非另外明確指出，否則本披露的量，例如約10-200mg、約10-190mg、約10-180mg、10-170mg、約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg典型地與寡核苷酸的游離酸形式相當。在一些實施例中，wve-003以與約10-200mg、約10-190mg、約10-180mg、約10-170mg、約10-160mg、約10-150mg、約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg?wve-003游離酸形式相當的劑量施用于或遞送至受試者。在一些實施例中，劑量與約10mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約20mgwve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約30mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約60mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約90mgwve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約120mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，劑量與約150mg?wve-003游離酸形式相當。
25、在一些實施例中，htt寡核苷酸或組合物以約10mg、約20mg、約30mg、40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的劑量施用于或遞送至受試者。在一些實施例中，wve-003以與約10mg、約20mg、約30mg、40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg?wve-003游離酸形式相當的劑量施用于或遞送至受試者。如本文所述，wve-003可以以各種形式，包括各種藥學上可接受的鹽形式施用或遞送。在一些實施例中，施用于受試者的組合物包含wve-003的一種或多種形式，例如一種或多種藥學上可接受的鹽形式。在一些實施例中，組合物是液體組合物。在一些實施例中，將wve-003溶解在合適的液體中，例如水或如本文所述的合適的緩沖液諸如緩沖鹽水、腦脊液(csf)、人工腦脊液(acsf)等。
26、用于制備例如wve-003的寡核苷酸及其產物的有用技術如本文所述。在一些實施例中，寡核苷酸(例如，wve-003)作為如本文所述的手性控制的寡核苷酸組合物施用。在一些實施例中，每個手性核苷酸間鍵聯獨立地具有約97％、98％、99％或更高的立體純度。在一些實施例中，組合物中寡核苷酸(例如，wve-003)的立體純度可以通過每個手性核苷酸間鍵聯處的立體純度(或立體選擇性)的乘積來表示。在一些實施例中，手性核苷酸間鍵聯的立體純度/立體選擇性可以通過在形成包含手性核苷酸間鍵聯及其所鍵合的兩個核苷的相應二聚體期間的立體純度/立體選擇性來評估。在一些實施例中，在形成手性核苷酸間鍵聯時，手性核苷酸間鍵聯的立體純度/立體選擇性可以通過寡核苷酸合成期間的立體純度/立體選擇性來評估(例如，手性核苷酸間鍵聯形成之后但下一個核苷酸間鍵聯形成之前的乘積評估)。在一些實施例中，產物寡核苷酸(例如，wve-003)中的手性核苷酸間鍵聯的立體純度/立體選擇性被認為是在二聚體形成中或在寡核苷酸合成期間觀察到的立體純度/立體選擇性。在一些實施例中，在二聚體形成中或在寡核苷酸合成期間觀察到的立體純度/立體選擇性彼此相同或非常接近。本領域技術人員理解，每個手性核苷酸間鍵聯的立體純度/立體選擇性可以是不同的，盡管根據各種提供的技術，其在每個手性核苷酸間鍵聯處始終較高(例如，約97％、98％、99％或更高)。在一些實施例中，每個手性核苷酸間鍵聯獨立地具有約97％、98％、99％或更高的立體純度。在一些實施例中，至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15個核苷酸間鍵聯獨立地具有約98％、99％或更高的立體純度。在一些實施例中，至少1、2、3、4、5、6、或7個核苷酸間鍵聯獨立地具有約99％或更高的立體純度。在一些實施例中，不超過1、2、3、4、或5個獨立地具有小于約98％的立體純度。在一些實施例中，不超過1、2、3、4、或5個獨立地具有小于約98％的立體純度，但各自仍然獨立地高于約97％。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約75％或更高。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約80％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約81％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約82％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約83％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約84％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，wve-003的立體純度為約85％或更高(例如，作為相應二聚體的立體純度的乘積)。在一些實施例中，所施用的寡核苷酸的量包括寡核苷酸的立體異構體的量(例如，達到在制造期間不能分離的程度)。在一些實施例中，所施用的寡核苷酸的量不包括其他雜質，諸如在寡核苷酸合成期間觀察到的較短的寡核苷酸(如本領域技術人員所理解的，達到所利用的純化方法可以去除這樣的雜質的程度)。
27、如本領域技術人員所理解的，寡核苷酸可以以各種形式施用，包括一種或多種藥學上可接受的鹽形式。例如，在一些實施例中，寡核苷酸作為在合適的溶液(例如，水或合適的緩沖液系統)中溶解的寡核苷酸和/或其鹽施用。在一些實施例中，寡核苷酸的量包括寡核苷酸的所有形式，并且當以重量(例如，mg)表示時，這樣的重量包括寡核苷酸的所有形式的重量，但全部轉化為酸形式的重量(例如，對于wve-003，使用分子量7257.94游離酸)。可替代地或另外，寡核苷酸的量可以以摩爾數表示，在一些實施例中，其包括所有形式的寡核苷酸的摩爾數(例如，約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的wve-003對應于約1.4、約2.8、約4.1、約5.5、約6.9、約8.3、約9.6、約10.9、約12.4、約13.8、約15.2、約16.5、約17.9、約19.3、約20.7、約22.0、或約23.1umolwve-003)。
28、如本文所述，可以按各種合適的頻率施用多個劑量，例如約每3周、約每4周、約每8周、約每12周、約每月一次、約每兩個月一次、或約每季度一次，如本文所述。在一些實施例中，每個劑量獨立地與約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，htt寡核苷酸或組合物以每個月約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的劑量施用于受試者。在一些實施例中，htt寡核苷酸或組合物以每8周約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的劑量施用于受試者。在一些實施例中，htt寡核苷酸或組合物以每12周約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg的劑量施用于受試者。在一些實施例中，所提供的技術提供長持續時間。在一些實施例中，每兩個月或以更低頻率施用劑量。在一些實施例中，每季度或以更低頻率施用劑量。
29、在一些實施例中，本披露是關于：一種治療和/或預防有需要的受試者(例如，患者，諸如人類患者)的亨廷頓病的方法；一種等位基因特異性敲低受試者中的突變型亨廷頓蛋白轉錄物的方法；和/或一種用于降低亨廷頓病的一種或多種癥狀的嚴重程度和/或延遲其發作的方法，其中該方法包括以多個劑量施用wve-003，每個劑量獨立地與約10mg、約20mg、約30mg、約40mg、約50mg、約60mg、約70mg、約80mg、約90mg、約100mg、約110mg、約120mg、約130mg、約140mg、約150mg、約160mg、或約168mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，在本披露的方法中，每個劑量的量保持恒定(例如，患者接受的每個劑量為約30mg；或者患者接受的每個劑量為約60mg；或者患者接受的每個劑量為約90mg；或者患者接受的每個劑量為約120mg)。在一些實施例中，每個劑量的量隨時間推移而變化(例如，患者可以在特定劑量下維持一個或多個劑量，并且稍后，由于功效和/或安全性或其他問題，每個劑量的量可以增加或減少)。在一些實施例中，施用多個劑量，并且每個劑量獨立地是約30mg?wve-003游離酸形式。在一些實施例中，大約每月或大約每4周一次施用多個劑量。在一些實施例中，這些劑量大約每月或大約每4周一次施用，除了第二與第四劑量之間的大約兩個月或大約八周之外。在一些實施例中，大約每8周一次施用多個劑量。例如，在一些實施例中，方法包括大約每8周一次施用多個劑量，其中每個劑量獨立地與約30mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，大約每12周一次施用多個劑量。例如，在一些實施例中，方法包括大約每12周一次施用多個劑量，其中每個劑量獨立地與約30mg?wve-003游離酸形式相當。在一些實施例中，每個劑量作為如本文所述的藥物組合物施用。在一些實施例中，劑量施用至少約2次。在一些實施例中，劑量施用至少約3次。在一些實施例中，劑量施用至少約4次。在一些實施例中，劑量與緊鄰其后的劑量之間的間隔獨立地是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12周，或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或更多個月。在一些實施例中，每個劑量與緊鄰其后的劑量之間的間隔獨立地是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12周，或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或更多個月。在一些實施例中，間隔是約1周。在一些實施例中，間隔是約2周。在一些實施例中，間隔是約3周。在一些實施例中，間隔是約4周。在一些實施例中，間隔是約5周。在一些實施例中，間隔是約6周。在一些實施例中，間隔是約7周。在一些實施例中，間隔是約8周。在一些實施例中，間隔是約9周。在一些實施例中，間隔是約10周。在一些實施例中，間隔是約9周。在一些實施例中，間隔是約11周。在一些實施例中，間隔是約9周。在一些實施例中，間隔是約12周。在一些實施例中，間隔是約1個月。在一些實施例中，間隔是約2個月。在一些實施例中，間隔是約3個月或更多個月。在一些實施例中，間隔是約3、4、5、6、7、8、或9個月。在一些實施例中，間隔是約3個月。在一些實施例中，間隔是約6個月。在一些實施例中，間隔是約9個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約1周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約2周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約3周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約4周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約5周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約6周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約7周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約8周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約9周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約10周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約11周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約12周或更多周。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約1個月或更多個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約2個月或更多個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約3個月或更多個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約3、4、5、6、7、8、或9個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約1個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約2個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約3個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約6個月。在一些實施例中，每個間隔獨立地是約9個月。在一些實施例中，所有間隔大致相同。在一些實施例中，一個或多個間隔比其他間隔更長。在一些實施例中，一個或多個間隔比其他間隔更短。在一些實施例中，多個或所有劑量的劑量頻率是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周，或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或更多個月。在一些實施例中，多個或所有劑量的劑量頻率是約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個或更多個月。在一些實施例中，施用一個或多個負荷劑量。在一些實施例中，不施用負荷劑量。
30、在一些實施例中，在指定為select-hd?1b/2a期試驗的臨床試驗中測試wve-003在各種方法中的使用。select-hd是1b/2a多中心、隨機化、雙盲、安慰劑對照研究，以評價wve-003在患有早期顯現亨廷頓病(hd)的成年患者中的安全性、耐受性、pk、藥效動力學(pd)和臨床作用，這些成年患者攜帶靶向單核苷酸多態性(snp)rs362273(snp3)。本研究的1期評價wve-003的單次遞增劑量(sad)。2期評價wve-003的多次遞增劑量(mad)。在一些實施例中，受試者患有早期顯現亨廷頓病。在一些實施例中，受試者為25歲或以上。在一些實施例中，受試者為60歲或以下。
31、在一些實施例中，鞘內施用寡核苷酸(例如，wve-003)或組合物。在一些實施例中，鞘內施用是脊柱間施用。在一些實施例中，本文所述的方法包括鞘內并且以本文所述的量施用htt寡核苷酸(例如，wve-003)或其組合物，該量例如與約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約110、約120、約130、約140、約150、或約168mg寡核苷酸(例如，wve-003)游離酸形式相當。在一些實施例中，本文所述的方法包括鞘內并且各自獨立地以本文所述的量和本文所述的劑量間隔(例如，每月)施用htt寡核苷酸(例如，wve-003)或其組合物，該量例如與約10、約20、約30、約60、約90、約120、約150、或約168mg寡核苷酸(例如，wve-003)游離酸形式相當。
32、在一些實施例中，當作為治療方案的一部分施用時，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物引發所希望的生物反應。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是當施用于患有或易患亨廷頓病的受試者時，足以治療、預防亨廷頓病(例如，亨廷頓病的至少一種癥狀)和/或延遲其發作的量(例如，約30、約60、約90、約120、約150、或約168mg游離酸形式)。
33、在一些實施例中，本文所述的方法包括施用治療有效量的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的步驟。在一些實施例中，htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物是或包含wve-003。
34、在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物能夠介導突變型htt轉錄物的臨床顯著量的等位基因特異性敲低。在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物不顯著降低野生型亨廷頓蛋白轉錄物或其基因產物的量。在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物不將野生型亨廷頓蛋白轉錄物或其基因產物的量降低至與臨床顯現的不良事件或副作用相關聯的水平。
35、在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物足夠低，以防止或減少由向受試者施用寡核苷酸或寡核苷酸組合物介導和/或與向受試者施用寡核苷酸或寡核苷酸組合物相關聯的至少約一種不良事件的發生和/或降低其嚴重程度。在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物足以介導受試者中突變型htt轉錄物的臨床顯著量的等位基因特異性敲低，但足夠低以防止或減少由向受試者施用寡核苷酸或寡核苷酸組合物介導和/或與向受試者施用寡核苷酸或寡核苷酸組合物相關聯的至少約一種不良事件的發生和/或降低其嚴重程度。
36、在一些實施例中，不良事件是不良作用。在一些實施例中，不良事件是輕度、中度、重度、或嚴重不良事件。在一些實施例中，不良事件是：發熱、頭痛、嘔吐、或心動過速。在一些實施例中，不良事件是或是促炎標志物(例如，c反應蛋白和補體)增加、aptt延長、血小板減少、肝酶變化(例如，ast和alt)或腎生物標志物變化(例如，bun，肌酸酐)，通過其測量，或與其相關。
37、在一些實施例中，治療有效量的htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物足以實現htt寡核苷酸或寡核苷酸組合物的臨床顯著的最大血漿濃度。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約30mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約60mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約90mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約120mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約150mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約168mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是30±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是60±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是90±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是120±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是150±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是168±25％mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約30mg、約60mg、約90mg、約120mg、或約150mg(與體重無關，因為大多數成年人的中樞神經系統的總體積相似)。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約30mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約60mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約90mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約120mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約150mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形或htt寡核苷酸組合物的治療有效量是約168mg。在一些實施例中，htt寡核苷酸是wve-003。
38、在一些實施例中，本披露提供了方法，這些方法包括向受試者施用與寡核苷酸的游離酸形式相當的約30、約60、約90、約120、約150、或約168mg的量的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物。
39、在一些實施例中，本披露提供了方法，這些方法包括向受試者施用約30、約60、約90、約120、約150、或約168mg的劑量的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物，其中該寡核苷酸是wve-003。在一些實施例中，大約每月一次或大約每四周施用劑量。在一些實施例中，大約每兩個月一次或大約每八周施用劑量。在一些實施例中，大約每三個月一次或大約每十二周施用劑量。在一些實施例中，第一劑量與第二劑量之間的時間是約2個月或約8周，并且大約每月一次或大約每四周施用每個后續劑量。在一些實施例中，第一劑量與第二劑量之間的時間是約3個月或約12周，并且大約每兩個月一次或大約每8周施用每個后續劑量。在一些實施例中，大約每兩個月一次或大約每8周施用每個后續劑量。在一些實施例中，大約每兩個月一次或大約每12周施用每個后續劑量。在一些實施例中，劑量施用至少約12周。在一些實施例中，劑量施用至少約16周。在一些實施例中，劑量施用至少約3個月。在一些實施例中，劑量施用至少約4個月。在一些實施例中，患者維持相同劑量或恒定劑量(例如，患者接受的每個劑量為30mg；或者患者接受的每個劑量為60mg；或者患者接受的每個劑量為90mg；或者患者接受的每個劑量為120mg)。在一些實施例中，患者接受多個劑量的不同量。例如，患者可以接受特定量的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的一個或多個初始劑量，并且由于功效、安全性或其他問題，患者接受的后續劑量可以增加或降低。
40、尤其是，本披露認識到提供具有高功效和低毒性的寡核苷酸及其使用方法的挑戰。在一些實施例中，本披露提供了具有降低的毒性的寡核苷酸，例如wve-003，以及組合物和方法。在一些實施例中，當遞送大致相同或相當量的寡核苷酸時，和/或當實現大致相同或相當水平的所希望的作用和/或作用時，所提供的技術提供降低的毒性水平。在一些實施例中，在大致相同或相當或更低的毒性水平下，可以遞送更多寡核苷酸，例如wve-003，和/或實現更高水平的所希望的作用和/或作用。在一些實施例中，參考寡核苷酸是非選擇性寡核苷酸。在一些實施例中，與wve-003相比，參考寡核苷酸具有不同的結構。在一些實施例中，與wve-003相比，參考寡核苷酸具有相同的堿基序列但不同的結構。在一些實施例中，參考寡核苷酸包含不同的修飾和/或其模式。在一些實施例中，參考寡核苷酸包含不同的核苷酸間鍵聯和/或其模式。在一些實施例中，參考寡核苷酸包含不同的鍵聯立體化學或其模式。在一些實施例中，參考寡核苷酸作為立體隨機組合物提供。在一些實施例中，參考寡核苷酸組合物作為手性控制的寡核苷酸組合物提供。在一些實施例中，參考寡核苷酸具有較低的純度。在一些實施例中，參考寡核苷酸具有較低的立體純度。在一些實施例中，參考寡核苷酸是wv-1092。在一些實施例中，參考寡核苷酸是wv-2603。
41、在一些實施例中，本披露提供了具有減少的免疫反應的寡核苷酸組合物和方法。在一些實施例中，本披露認識到由寡核苷酸誘導的各種毒性可能與細胞因子和/或補體活化相關。
42、在一些實施例中，htt寡核苷酸組合物(例如，wve-003)是手性控制的(例如，立體純的)。尤其是，立體隨機htt寡核苷酸制劑含有多個不同的化學實體，這些化學實體例如在htt寡核苷酸鏈內的單獨的骨架手性中心(例如，硫代磷酸酯)的立體化學結構上彼此不同。在不控制骨架手性中心的立體化學的情況下，立體隨機htt寡核苷酸制劑提供包含未確定水平的htt寡核苷酸立體異構體的不受控制的(或立體隨機)組合物。即使這些立體異構體可能具有相同的堿基序列和/或化學修飾，但它們是不同的化學實體，至少約由于它們不同的骨架立體化學，并且它們可以具有不同的特性，如本文所證明的，例如活性、毒性、分布等。尤其是，本披露提供了手性控制的組合物，這些手性控制的組合物是或者含有目的htt寡核苷酸的特定的立體異構體；與手性不受控的組合物相比，手性控制的組合物包含受控水平的htt寡核苷酸的特定立體異構體，或在手性控制的組合物中包含受控水平的組合物的所有寡核苷酸，或受控水平的共享特定堿基序列(例如，wve-003的堿基序列)的組合物的所有寡核苷酸共享鍵聯磷立體化學構型的共同模式(例如，wve-003的共同模式)。在一些實施例中，受控水平的與wve-003的形式共享相同組成的所有寡核苷酸是wve-003。在一些實施例中，wve-003的非對映純度是約或高于受控水平。
43、在一些實施例中，受控水平為至少約10％。在一些實施例中，受控水平為至少約20％。在一些實施例中，受控水平為至少約25％。
44、在一些實施例中，受控水平為至少約30％。在一些實施例中，受控水平為至少約40％。在一些實施例中，受控水平為至少約50％。在一些實施例中，受控水平為至少約60％。在一些實施例中，受控水平為至少約70％。在一些實施例中，受控水平為至少約75％。在一些實施例中，受控水平為至少約80％。在一些實施例中，受控水平為至少約85％。在一些實施例中，受控水平為至少約90％。在一些實施例中，受控水平為至少約95％。在一些實施例中，受控水平為至少約96％。在一些實施例中，受控水平為至少約97％。在一些實施例中，受控水平為至少約98％。在一些實施例中，受控水平為至少約99％。
45、在一些實施例中，htt寡核苷酸、htt寡核苷酸組合物、wve-003的治療有效量是約30、約60、約90、約120、約150、或約168mg。
46、在一些實施例中，htt寡核苷酸或其鹽形式或htt寡核苷酸組合物是或包含wve-003，其是能夠介導mhtt轉錄物的水平、表達和/或活性的等位基因特異性降低的手性控制的htt寡核苷酸組合物。
47、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以10mg至約168mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
48、在一些實施例中，人類受試者的htt基因：(a)在cag重復處是雜合的(其中一個等位基因包含有害的cag重復擴增，并且另一個等位基因不包含)，并且(b)在被htt寡核苷酸靶向的snp處是雜合的，其中該htt寡核苷酸能夠區分相同snp的兩個等位基因(例如，由于snp等位基因的序列的差異)；并且(c)有害cag重復與被該htt寡核苷酸靶向的snp等位基因在同一條染色體上；并且這樣的排列被稱為cag重復擴增和突變型snp等位基因處于同相，并且htt基因或其突變可以被描述為適于等位基因特異性敲低。
49、在一些實施例中，包含適于突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變的突變型htt基因是：包含有害突變(例如，cag重復擴增)的突變型htt基因，其中該有害突變與被特定htt寡核苷酸(例如，wve-003)靶向的snp的特定等位基因在同一條染色體上(例如，與該特定等位基因處于同相或處于相同相中)，其中snp等位基因被寡核苷酸靶向也靶向有害突變。
50、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約30mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
51、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約60mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
52、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約90mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
53、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約120mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
54、在一些實施例中，確定受試者表達mthtt轉錄物，該mthtt轉錄物與所施用的寡核苷酸，包括在snp位點(例如，rs362273)處的序列完全互補。在一些實施例中，確定受試者具有mthtt等位基因，該mthtt等位基因包含與所施用的寡核苷酸，包括在snp位點(例如，rs362273)處的序列相同的序列(如本領域技術人員所理解的，可以適當地認為u和t相同)或與所施用的寡核苷酸，包括在snp位點(例如，rs362273)處的序列完全互補。在一些實施例中，受試者對于snp位點和/或野生型或突變型htt是純合的。在一些實施例中，受試者對于snp位點和/或野生型或突變型htt是雜合的。在一些實施例中，受試者表達與所施用的寡核苷酸完全互補的mthtt轉錄物，和與所施用的寡核苷酸不完全互補的wthtt轉錄物。在一些實施例中，受試者具有mthtt等位基因，該mthtt等位基因包含與所施用的寡核苷酸的序列相同的序列(如本領域技術人員所理解的，可以適當地認為u和t相同)或與所施用的寡核苷酸的序列完全互補；和wthtt等位基因，該wthtt等位基因不包含與所施用的寡核苷酸的序列相同(如本領域技術人員所理解的，可以適當地認為u和t相同)或完全互補的序列。在一些實施例中，mthtt等位基因的轉錄物、蛋白質和/或活性的水平比wthtt的水平降低更多。mthtt等位基因與所施用的寡核苷酸完全互補，并且wthtt轉錄物與所施用的寡核苷酸不完全互補。各種技術是可用的并且可以根據本披露用于檢測和/或確定snp的特定同種型是否在相同的等位基因或轉錄物上。
55、在一些實施例中，本披露提供了一種用于確定受試者對于施用wve-003(或其鹽形式)進行治療的適用性的方法，所述方法包括以下步驟：
56、i)確定具有靶向單核苷酸多態性(snp)rs362273(snp3)的患者中突變型等位基因相對于野生型等位基因的存在；
57、ii)將步驟i)的具有該靶向單核苷酸多態性(snp)rs362273(snp3)的患者中突變型等位基因的水平與一個或多個參考樣品或參考值進行比較；
58、iii)確定該受試者是否可能或適合用wve-003治療，其中該受試者患有神經退行性障礙，諸如亨廷頓病或具有發展神經退行性障礙，諸如亨廷頓病的風險；以及
59、iv)向該受試者施用有效量的wve-003。
60、在一些實施例中，本披露提供了分相測定在檢測具有靶向單核苷酸多態性(snp)rs362273(snp3)的患者中突變型等位基因相對于野生型等位基因的存在，以確定用wve-003治療的適用性中的用途。
61、可以使用各種技術來確定特定的snp等位基因是否與疾病相關序列(例如htt的cag重復擴增)在同一條染色體上。典型地，如果snp等位基因和cag重復擴增在同一條染色體上，靶向snp等位基因的htt寡核苷酸也可以“靶向”與疾病相關的cag重復擴增，從而降低具有與疾病相關的突變的htt等位基因的表達、水平和/或活性。以這種方式，例如，htt寡核苷酸可以用于治療與htt相關的障礙，諸如亨廷頓病。因此，靶向snp的htt寡核苷酸與野生型等位基因相比可以優先降低htt的突變型等位基因的表達、水平和/或活性。
62、人和其他生物一樣是二倍體，對于分相技術，需要確定相同或不同染色體上基因座等位基因的連鎖。相應染色體上的序列稱為單倍型。確定哪些等位基因位于哪個染色體上的過程稱為分相，單體型分相或單倍型分型。分相信息可用于患者分層、鑒證和各種其他與htt相關的疾病和障礙(諸如亨廷頓病)的治療應用中。有關分相的其他一般信息，例如參見：twehey等人2011nat.rev.genet.[自然遺傳學綜述]12:215-223；和glusman等人2014genome?med.[基因組與醫學]6:73。
63、在針對諸如亨廷頓病等疾病的等位基因特異性療法中，分相數據可能非常重要。在某些疾病中，已經鑒定出遺傳損傷，諸如有害重復、缺失、插入、倒位或其他突變，諸如突變型(和與疾病相關的)htt等位基因中的擴增的cag重復擴增。在一些患者中，諸如htt的基因的一個等位基因可以在遺傳基因座處包含與疾病相關的突變，而另一等位基因是正常的、野生型的或在其他方面與疾病無關的或與疾病相關性較低。在一些實施例中，等位基因特異性療法可以靶向包含疾病相關突變的htt等位基因，但不靶向相應的野生型等位基因。在一些實施例中，等位基因特異性療法可以靶向在特定基因座處包含疾病相關突變(諸如cag重復擴增(或擴增的cag段))的htt等位基因，但不是通過直接靶向該基因座，而是靶向突變型等位基因上的不同基因座。作為非限制性實例，等位基因特異性療法可以通過靶向同一等位基因中的不同基因座，諸如同一基因中的snp(單核苷酸多態性)，來靶向在基因座處包含疾病相關突變的等位基因。
64、作為非限制性實例，一些與疾病相關的遺傳損傷可能難以靶向或否則不易于靶向。作為非限制性實例，一些基因諸如突變型htt包含重復(例如，三核苷酸或四核苷酸重復)；在一些情況下，諸如亨廷頓病，少量重復與疾病不相關，但異常大量重復或重復擴增與疾病相關。由于重復同時存在于野生型和突變型等位基因上，因此可能難以直接靶向與疾病相關的重復。但是，如果特定的snp變體與疾病相關的重復擴增存在于同一等位基因上，而不存在于野生型等位基因上，則該snp變體可以用于靶向以突變型等位基因而非野生型等位基因為靶點的等位基因特異性療法。
65、作為非限制性實例，個體的分相數據表明是否特定的snp與損傷同相(例如，在同一條染色體或轉錄物上)并且因此可以用治療性核酸靶向snp。然后治療劑可以靶向突變型基因，而不靶向野生型等位基因。如果必須表達野生型等位基因，則獲取僅針對突變型等位基因的分相數據將特別有用。
66、作為另一個非限制性實例，如果已知個體在同一基因上具有兩個遺傳基因座的每個的野生型和突變型等位基因，則分相信息是有用的。分相信息將揭示基因的兩個拷貝是否各自具有一個突變型等位基因，或者是否基因的一個拷貝具有兩個突變，而另一個拷貝在兩個等位基因上均為野生型。
67、在一些實施例中，本披露尤其提出了用于在核酸模板上對遺傳基因座進行分相的各種方法。作為非限制性實例，本披露提出了用于在染色體上對遺傳基因座(諸如遺傳損傷(諸如倒位、融合、缺失、插入或其他突變))和另一遺傳基因座(諸如snp)進行分相的方法；這兩個遺傳基因座可以在同一基因中，也可以在不同基因中。
68、在非限制性實例中，實例患者可能患有亨廷頓病，該亨廷頓病與亨廷頓蛋白基因(htt)中的突變連鎖，該突變包含序列cag的過量重復(例如，重復擴增)。在一些實施例中，可以考慮用等位基因特異性治療劑(例如，反義寡核苷酸或rnai劑)治療患者，該治療劑識別htt基因中遺傳基因座的特定等位基因變體(在重復擴增之外)，作為非限制性實例，snp。如果分相揭示患者的同一條染色體既包含重復擴增又包含等位基因特異性治療劑識別的遺傳基因座(例如，snp)的特定等位基因變體，則該患者符合用該等位基因特異性治療劑進行治療。
69、用于分相的各種方法是本領域已知的，包括但不限于以下方法中描述的那些：wo2018/022473；和berger等人2015res.comp.mol.biol.[比較分子生物學研究]9029:28-29；castel等人2015genome?biol.[基因組生物學]16:195；castel等人2016phaser:longrange?phasing?and?haplotypic?expression?from?rna?sequencing[phaser：rna測序的長距離分相和單倍型表達],doi:http://dx.doi.org/10.1101/039529；delaneau等人2012nat.methods[自然方法]9:179-181；garg等人2016read-based?phasing?of?relatedindividuals[相關個人的基于讀段的分相]；hickey等人2011genet.select.evol.[遺傳選擇進化]43:12；kuleshov等人2014nat.biotech.[自然生物技術]32:261-266；laver等人2016nature?scientific?reports[自然科學報道]|6:21746|doi:10.1038/srep21746；o'connell等人2014plos?one?10:e1004234；regan等人2015plos?one?10:e0118270；roach等人2011am.j.hum.genet.[美國人類遺傳學雜志]89:382-397；和yang等人2013bioinformatics[生物信息學]29:2245-2252。在一些實施例中，測序，特別是可以產生長單讀段的測序，可以用于分相。
70、可以適合用于檢測患者中的突變型等位基因的分相測定的一個實例是等位基因特異性pcr或等位基因特異性長距離pcr，可以進行采用等位基因特異性引物以在序列的野生型變體存在下檢測核酸序列中的突變的這種測定。等位基因特異性pcr是其中選擇性擴增和檢測存在于pcr反應混合物中的核酸序列的變體的技術。等位基因特異性pcr采用至少一個“等位基因特異性引物”。術語“等位基因特異性”引物通常是指僅當核酸序列的特定變體存在于反應混合物中時才在pcr反應中發生延伸的引物。換言之，等位基因特異性引物以這樣的方式設計，使得它們區分核酸的變體并且選擇性擴增包括待檢測的變體的核酸模板。
71、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約150mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
72、在本文所述的方法的一些實施例中，通過合適的方法(諸如定量擴增和/或核酸測序)檢測核酸序列。定量擴增的方法在以下中披露：例如美國專利號5,210,015；5,804,375；6,127,155；6,180,349；6,033,854；和5,972,602，以及例如holland等人,proc.natl.acad.sci.[美國國家科學院院刊]88:7276-7280(1991)，gibson等人,genomeresearch[基因組研究]6:995-1001(1996)；degraves等人,biotechniques[生物技術]34(1):106-10,112-5(2003)；deiman?b等人,molbiotechnol.[分子生物技術]20(2):163-79(2002)。可以“實時”監測擴增。盡管可以使用標準桑格雙脫氧測序或其他較老的核苷酸測序方法，但是當使用高通量測序時，測序可以是特別有效的，例如“下一代測序”方法，諸如hiseqtm、miseqtm或基因組分析儀，solidtm或ion?torrenttm(各自可從生命技術公司(lifetechnologies)獲得)和454tm測序(來自羅氏診斷公司(roche?diagnostics))。例如，在高通量測序中，使用多個模板和多個引物的并行測序反應允許對基因組或基因組的大部分進行快速測序。參見例如wo?03/004690、wo?03/054142、wo?2004/069849、wo?2004/070005、wo2004/070007、wo?2005/003375、wo?00/06770、wo?00/27521、wo?00/58507、wo?01/23610、wo01/57248、wo?01/57249、wo?02/061127、wo?03/016565、wo?03/048387、wo?2004/018497、wo2004/018493、wo?2004/050915、wo?2004/076692、wo?2005/021786、wo?2005/047301、wo2005/065814、wo?2005/068656、wo?2005/068089、wo?2005/078130，以及seo等人,proc.natlacad.sci.usa[美國國家科學院院刊](2004)101:5488-5493。在一些實施例中，通過選自以下的方法之一對擴增子進行測序：堿基摻入法，例如焦磷酸測序法(美國專利號6,274,320、6,258,568和6,210,891)；氫離子檢測法(isfet)(例如，美國專利號8,262,900)，或染料終止子檢測法(美國專利號7,835,871、8,244,479、8,315,817和8,412,467)。還可以采用深度測序技術和儀器(例如，能夠進行數字序列讀出的技術和儀器)。儀器的實例包括但不限于gs儀器家族(454生命科學公司，布蘭福德，康涅狄格州(454lifesciences,branford,conn.))；ion?proton*和pgmtm(生命技術公司，格蘭德島，紐約州(lifetechnologies,grand?island,n.y.))；hiseq*和miseq*或其任何改進和改良。在一些實施例中，測序技術是或包括長讀段測序。在一些實施例中，長讀段測序涵蓋兩個或更多個序列元件，例如，在一些實施例中，一個是snp并且另一個是突變(例如，點突變，cag重復等)。
73、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約168mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
74、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約30mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
75、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約60mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
76、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約90mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
77、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約120mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
78、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約150mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
79、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約168mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
80、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約30mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
81、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約60mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
82、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約90mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
83、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約120mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
84、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約150mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
85、在一些實施例中，本披露是關于：一種用于治療患有亨廷頓病的受試者的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以下步驟：以約168mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)，使得該受試者的疾病進展延遲，和/或亨廷頓病的發作延遲，和/或亨廷頓病的癥狀的嚴重程度降低。
86、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約30mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)的步驟。
87、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約60mg的劑量向該受試者施用wve-003的步驟。
88、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約90mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)的步驟。
89、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約120mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)的步驟。
90、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約150mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)的步驟。
91、在一些實施例中，本披露是關于：一種延遲患有亨廷頓病的受試者的亨廷頓病的發作和/或降低亨廷頓病的癥狀的嚴重程度的方法，該受試者具有突變型htt基因，該突變型htt基因包含適于該突變型htt基因的等位基因特異性敲低的突變，其中該方法包括以約168mg的劑量向該受試者施用wve-003(或其鹽形式)的步驟。
92、如本文所述，wve-003的量典型地包括所施用的wve-003的所有形式，但全部轉化為酸形式的量。
93、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中在wve-003的第一劑量之前至少約一個月向該受試者施用類固醇。
94、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約4個月。
95、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約8個月。
96、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中大約每月向該受試者施用寡核苷酸，持續至少約12個月。
97、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中大約每月向該受試者施用寡核苷酸，持續至少約16個月。
98、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中大約每月向該受試者施用寡核苷酸，持續至少約48個月。
99、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸鞘內遞送。
100、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該方法進一步包括確認該受試者在htt基因中具有突變的步驟，該突變適于該突變型htt基因或其基因產物轉錄物的等位基因特異性敲低。
101、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品。
102、在一些實施例中，該方法包括凍干步驟(例如，冷凍干燥或在真空下冷凍干燥)。
103、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為由該寡核苷酸的凍干(例如，冷凍干燥)制劑重構的液體配制品。
104、在一些實施例中，本披露是關于：wve-003的一種凍干(例如，冷凍干燥)制劑。
105、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品，其中該液體配制品包含該寡核苷酸、氯化鈉和水。
106、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品，其中該液體配制品是用氯化鈉溶液由凍干制劑重構的。
107、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品，其中該液體配制品是用0.9％氯化鈉溶液由凍干制劑重構的。
108、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品，其中該液體配制品是用無菌氯化鈉溶液由凍干制劑重構的。
109、在一些實施例中，本披露是關于：如前述實施例中任一項所述的方法，其中該寡核苷酸被配制為液體配制品，其中該液體配制品是用0.9％無菌氯化鈉溶液由凍干制劑重構的。
110、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是干燥(或干燥的)固體。
111、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是干粉。
112、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是通過將wve-003的液體配制品在水中凍干制備的干粉。
113、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是在一次性透明玻璃小瓶中的干粉。
114、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是在小瓶中的約20mg干粉。
115、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是在10ml小瓶中的干粉。
116、在一些實施例中，wve-003的凍干制劑是在10ml小瓶中的約20mg干粉。
117、在一些實施例中，在wve-003的第一劑量之前向該受試者施用類固醇。
118、在一些實施例中，在wve-003的第一劑量之前至少約一個月向該受試者施用類固醇。
119、在一些實施例中，大約每月一次或大約每四周向該受試者施用wve-003的劑量。
120、在一些實施例中，大約每兩個月一次或大約每八周向該受試者施用wve-003的劑量。
121、在一些實施例中，大約每月一次或大約每四周向該受試者施用wve-003的劑量，不同的是第一劑量與第二劑量之間的時間是約2個月或約8周，并且大約每月一次或大約每四周施用每個后續劑量。
122、在一些實施例中，大約每兩個月一次或大約每8周向該受試者施用wve-003的劑量，不同的是第一劑量與第二劑量之間的時間是約3個月或約12周，并且大約每兩個月一次或大約每8周施用每個后續劑量。
123、在一些實施例中，大約每8周向該受試者施用wve-003，持續至少約16周。
124、在一些實施例中，大約每12周向該受試者施用wve-003，持續至少約12周。
125、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約4個月。
126、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約8個月。
127、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約12個月。
128、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約16個月。
129、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用wve-003，持續至少約48個月。
130、在一些實施例中，在htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的第一劑量之前向該受試者施用類固醇。
131、在一些實施例中，在htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的第一劑量之前至少約一個月向該受試者施用類固醇。
132、在一些實施例中，在施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的24小時內向該受試者施用氫化可的松和/或對乙酰氨基酚。
133、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物，持續至少約8個月。
134、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物，持續至少約12個月。
135、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物，持續至少約16個月。
136、在一些實施例中，大約每月向該受試者施用htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物，持續至少約48個月。
137、在一些實施例中，該方法進一步包括確認該受試者在htt基因中具有突變的步驟，該突變適于mhtt轉錄物的水平、表達和/或活性的等位基因特異性降低。
138、在一些實施例中，該方法進一步包括確認該受試者在htt基因中具有突變的步驟，該突變適于突變型htt轉錄物的等位基因特異性敲低。
139、在一些實施例中，本披露提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含本披露的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物(例如，wve-003)和藥學上可接受的載劑。
140、在一些實施例中，本披露提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含本披露的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物(例如，wve-003)，該htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物可以通過將這樣的寡聚化合物與合適的藥學上可接受的稀釋劑或載劑組合而在藥物組合物中使用。藥學上可接受的稀釋劑包括磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。pbs是適于在有待腸胃外遞送的組合物中使用的稀釋劑。因此，在某些實施例中，在本文所述的方法中采用的是藥物組合物，該藥物組合物包含本披露的htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物(例如，wve-003)和藥學上可接受的稀釋劑。在某些實施例中，藥學上可接受的稀釋劑是pbs。在某些實施例中，藥學上可接受的稀釋劑是人工csf(acsf)。
141、在某些實施例中，藥物組合物直接施用于csf(例如，it和/或icv注射和/或輸注)和全身施用。
142、在一些實施例中，本披露提供了一種用于靶htt轉錄物的等位基因特異性敲低的方法，該方法包括施用本披露的htt寡核苷酸組合物的步驟。在一些實施例中，本披露提供了一種用于降低htt轉錄物或其產物的水平的方法，該方法包括施用本披露的htt寡核苷酸組合物的步驟。一種用于治療亨廷頓病的方法，該方法包括向易患亨廷頓病或患有亨廷頓病的受試者施用本披露中所述的組合物的步驟。
143、在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療亨廷頓病的方法，該方法包括向易患亨廷頓病或患有亨廷頓病的受試者施用包含本文披露的任何htt寡核苷酸的組合物的步驟。
144、在一些實施例中，本披露提供了一種用于治療亨廷頓病的方法，該方法包括(a)向易患亨廷頓病或患有亨廷頓病的受試者施用包含本文披露的任何htt寡核苷酸的組合物，和(b)向該受試者施用能夠預防、治療、改善亨廷頓病或減緩亨廷頓病進展的另外的治療。在一些實施例中，本披露提供了一種方法，該方法包括向受試者施用wve-003，其中確定該受試者具有與wve-003的堿基序列相同或完全互補的遺傳序列。在一些實施例中，本披露提供了一種方法，該方法包括向受試者施用wve-003，其中確定該受試者具有遺傳序列，該遺傳序列包含與wve-003的堿基序列相同或完全互補的序列以及是或編碼擴增的cag重復的序列。在一些實施例中，本披露提供了一種方法，該方法包括向受試者施用wve-003，其中確定該受試者具有編碼轉錄物的遺傳序列，該轉錄物包含htt中的擴增的cag重復并且與wve-003的堿基序列完全互補。在一些實施例中，本披露提供了一種方法，該方法包括向受試者施用wve-003，其中確定該受試者表達htt轉錄物，該htt轉錄物包含擴增的cag重復并且與wve-003的堿基序列完全互補。
145、本披露還提供了htt寡核苷酸或htt寡核苷酸組合物的各種配制品，其中的任一種可以在本文所述的任何方法中使用。
146、在一些實施例中，在本文所述的任何方法中，突變型htt(例如，轉錄物和/或其基因產物)的水平、表達和/或活性降低至少約5％。
147、在一些實施例中，在本文所述的任何方法中，突變型htt(例如，轉錄物和/或其基因產物)的水平、表達和/或活性降低至少約10％。