本公開提供了細胞外囊泡(ev)，例如外泌體，其可用作用于預防或治療癌癥和其他疾病的藥劑，該細胞外囊泡包含經由可裂解接頭和錨定部分與細胞外囊泡，例如外泌體連接的至少一種生物活性分子。
背景技術：
1、許多生物活性化合物具有有效的生物活性，其具有治療意義。然而，這些化合物通常在非靶器官中表現出毒性。限制非靶組織暴露的一種方式是將小分子與基于親和力的試劑(諸如抗體)進行化學綴合，這可以將治療化合物引導至特定的細胞類型(dosio,f.等人,toxins(basel)3(7):848-883(2011))，但這種方式受到以下的限制：可以附接至抗體的目標化合物的分子的數量(通常每個抗體2至6個分子)，以及與靶向的、相關的患病/效應細胞特異性結合而不與非靶細胞結合的抗體的可用性/存在。這兩個問題分別通過降低效力以及增加全身毒性限制抗體-藥物綴合物(adc)的使用。因此，需要比adc具有更高有效載荷的遞送系統，該遞送系統可以選擇性地靶向特定組織或器官，而同時限制對治療化合物的總體全身暴露。
2、ev，例如外泌體，是細胞間通訊的重要介質。它們也是許多疾病(諸如癌癥)的診斷和預后的重要生物標志物。作為藥物遞送媒介物，ev，例如外泌體，與傳統藥物遞送方法(例如肽免疫、dna疫苗)相比作為許多治療領域的新治療方式具有許多優勢。然而，盡管其具有優勢，許多ev，例如外泌體，具有有限的臨床療效。例如，在ii期臨床試驗中，樹突狀細胞衍生的外泌體(dex)被研究作為患有無法手術的非小細胞肺癌(nsclc)的患者一線化療后的維持免疫療法。然而，由于未達到主要終點(至少50％的患者具有化療停止后4個月的無進展生存期(pfs))，試驗被終止。besse,b.,等人,oncoimmunology?5(4):e1071008(2015)。
3、因此，需要新穎且更有效的工程化ev，例如外泌體，以更好地實現基于ev的技術的治療用途和其他應用。
技術實現思路
1、本公開提供了一種細胞外囊泡(ev)，其包含經由根據式i的錨定部分(am)附接至ev的生物活性分子(bam)：
2、am-sp1-l1-sp2-bam???(式i)
3、其中l1為包含以下的可裂解鍵：多核苷酸基；選自丙氨酸-丙氨酸-天冬酰胺、纈氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甘氨酸、谷氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、天冬氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、絲氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、賴氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、環丁烷-1,1-二甲酰胺-瓜氨酸和丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸的肽基；焦磷酸酰氧基；或甲硅烷基醚；并且sp1和sp2分別為任選的第一和第二間隔子。
4、在一些方面，am在5′位置處與bam共價連接。在一些方面，am在3′位置處與bam共價連接。
5、在一些方面，l1包含為三核苷酸基或更高級核苷酸基的多核苷酸基。在一些方面，多核苷酸基為包含dtdtdtdt的四核苷酸基，其中dt為脫氧胸苷。
6、在一些方面，l1包含選自丙氨酸-丙氨酸-天冬酰胺、纈氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甘氨酸、谷氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、天冬氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、絲氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、賴氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸、環丁烷-1,1-二甲酰胺-瓜氨酸和丙氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸的肽基。
7、在一些方面，l1包含焦磷酸酰氧基。
8、在一些方面，l1包含甲硅烷基醚。在一些方面，甲硅烷基醚包括–osir1r2o-，其中r1和r2相同或不同并且各自為c1-8烷基或芳基。在一些方面，甲硅烷基醚包括–osir1r2o-并且r1和r2兩者均為異丙基。
9、在一些方面，am包括固醇、脂質、維生素、肽或其組合。
10、在一些方面，am包括固醇，該固醇包括膽固醇、巰基膽固醇、麥角固醇、7-脫氫膽固醇、24s-羥基膽固醇、羊毛甾醇、環阿屯醇、巖藻甾醇、馬尾藻甾醇、菜油甾醇、β-谷甾醇、谷甾烷醇、糞甾烷醇、燕麥甾醇、豆甾醇或其組合。在一些方面，固醇為膽固醇。
11、在一些方面，am包括脂質，該脂質包括脂肪酸或磷脂。在一些方面，脂肪酸為直鏈脂肪酸、支鏈脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、羥基脂肪酸、多羧酸或其任意組合。在一些方面，直鏈脂肪酸為丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸或硬脂酸。在一些方面，直鏈脂肪酸為棕櫚酸。在一些方面，磷脂包括16:01,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯](16:0pdp?pe)、16:01,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-[4-(對馬來酰亞胺基甲基)環己烷-甲酰胺](16:0pe?mcc)或16:01,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-(氰尿酸)(16:0氰尿酸pe)。
12、在一些方面，am包括維生素，該維生素包括生育酚、生育三烯酚、維生素d、維生素k、核黃素、煙酸或吡哆醇。在一些方面，維生素為生育酚。
13、在一些方面，am附接至ev的外表面。
14、在一些方面，bam包括肽、多肽基、多核苷酸基、蛋白質、抗體或其抗原結合片段、化學化合物或其任意組合。在一些方面，bam包括反義寡核苷酸基(aso)、sirna、mirna、shrna、核酸或其任意組合。在一些方面，bam包括aso。在一些方面，aso靶向轉錄本。在一些方面，轉錄本為stat6轉錄本、egfp轉錄本、cebp/β轉錄本、stat3轉錄本、kras轉錄本、nras轉錄本、nlpr3轉錄本、ffluc轉錄本、rluc轉錄本、myc轉錄本或其任意組合。
15、在一些方面，sp1和sp2相同或不同，并且各自包含亞烷基、聚氧基亞烷基、琥珀酰亞胺基、馬來酰亞胺基、芳基、醚、羰基、羧酸根、氨基甲酰基、硫醚、磺基、硫代羰基、硫代氨基甲酰基、硫代琥珀酰亞胺基、氨基、酰胺基、酰肼基(hydrazido)、硫代磷酸根、1,2,3-三唑基、二苯甲酰基環辛烯基、雙環壬烯基、對氨基苯甲酰基、對氨基芐基氨基甲酸根或其組合，并且sp1和sp2中的至少一者存在于式(i)中。在一些方面，sp1和sp2中的至少一者包含c2-8亞烷基、聚氧基烯基、馬來酰亞胺基、氨基甲酰基、硫代、酰胺基、1,2,3-三唑基、二苯甲酰基環辛烯基、雙環壬烯基、1,2,3-三唑基二苯甲酰基環辛烯基、1,2,3-三唑基雙環壬烯基、對氨基苯甲酰基、對氨基芐基氨基甲酸根或其組合。在一些方面，sp1和sp2中的至少一者包含c3亞烷基、c6亞烷基或c8亞烷基。在一些方面，sp1和sp2中的至少一者包含含有2至15個–och2ch2-重復單元的聚氧基亞烷基。在一些方面，sp1和sp2中的至少一者進一步包含氨基甲酰基、酰胺基、硫代琥珀酰亞胺基、1,2,3-三唑基二苯甲酰基環辛烯基、1,2,3-三唑基雙環壬烯基或其組合。。
16、在一些方面，sp1存在于式(i)中。在一些方面，sp2存在于式(i)中。在一些方面，sp1和sp2兩者均存在于式(i)中并且相同。在一些方面，sp1和sp2兩者均存在于式(i)中并且不同。
17、在一些方面，式(i)為選自以下的構建體
18、
19、以及
20、
21、本公開提供了一種包含本文所描述的ev和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
22、本公開還提供了一種包含本文所描述的ev或其藥物組合物以及使用說明的試劑盒。
23、本公開提供了一種治療或預防有此需要的受試者的疾病或病癥的方法，該方法包括向該受試者施用有效量的本文所描述的ev或其藥物組合物。在一些方面，疾病或病癥為癌癥、移植物抗宿主病(gvhd)、自身免疫性疾病、傳染性疾病、纖維化疾病、炎癥性疾病、神經退行性病癥、中樞神經疾病、肌營養不良癥或代謝性疾病。