本公開涉及對cd45特異的抗體和抗體片段。所述抗體是鼠抗體的改良人源化版本。除了復雜的人源化活動之外，所述抗體還經過工程化以去除cdr區內的多個有害基序而不丟失任何有益性質。所述抗體有用于治療與cd45相關的疾病。關于資助的聲明導致本技術的項目已收到來自歐洲研究理事會(erc)根據european?union’shorizon?2020研究與創新計劃(撥款方案編號818806)提供的資助。
背景技術：
1、cd45，也稱為蛋白質酪氨酸磷酸酶受體類型c(ptprc)，是一種由ptprc基因編碼的酶(kaplan?et?al.,pnas?87:7000-7004(1990))。cd45是蛋白質酪氨酸磷酸酶(ptp)家族的成員，該家族包括調節多種細胞過程的信號分子，所述細胞過程包括細胞生長、分化、有絲分裂周期和致癌轉化。cd45含有細胞外結構域、單一跨膜片段和兩個串聯的胞質內催化結構域，并因此屬于受體類型ptp家族。cd45是一種i型跨膜蛋白質，以多種亞型存在于分化的造血細胞(除了例如紅細胞)上(holmes,immunology?7:145-55(2006))。cd45已被證明是t細胞和b細胞抗原受體信號傳導的調節劑。它通過其細胞外結構域與抗原受體復合物的組分直接相互作用，或通過經由其細胞質結構域激活抗原受體信號傳導所需的各種src家族激酶(sfk)(諸如lck)來發揮功能。cd45還抑制jak激酶，并因此起到細胞因子受體信號傳導的負調節劑的功能。
2、cd45存在于造血細胞(包括hsc、白細胞和破骨細胞)的表面上，造血細胞都是造血來源的(shivtiel?et?al.,j?exp?med?205:2381(2008))。人類中cd45內的缺失突變與嚴重的免疫缺陷相關。這主要是因為t細胞上缺乏cd45，而t細胞上cd45通常含量豐富并且需要以在抗原反應期間調節sfk活性。cd45-缺陷(cd45-/-)小鼠骨髓含有正常數量的造血細胞，但最原始的hsc數量減少，并且它們響應于g-csf的動員受到損害。部分地，這種缺陷是hsc所固有的；在沒有cd45介導的sfk活性下調的情況下，整合素介導的粘附會較高并且hsc更有可能留在干細胞生態位內。cd45-/-hsc還缺乏g-csf刺激的動員和歸巢至趨化因子cxcl12/sdf-1，這會對移植后的細胞植入產生負面影響。這些缺陷可以通過補充sfk抑制劑來恢復，表明這一作用通常由cd45執行。同樣地，cd45-/-接受者也表現出有缺陷的植入以及正常hsc的隨后動員，表明了cd45在干細胞生態位以及hsc中的作用(shivtiel?et?al.,jexp?med205:2381(2008))。例如，由于cd45在hsc和白細胞上表達，它成為包括調理療法、免疫重置和疾病治療在內的治療靶。
3、本領域已知多種抗cd45部分，它們中的一些目前正在開發中。bc8是一種小鼠雜交瘤抗體，商業上可從ichorbio獲得(#ich1155)。bc8抗體是actinium?pharmaceuticals開發的抗cd45抗體-放射性綴合物的基礎(wo2017155937、wo2019084258、wo2020159656)。wo2016016442、wo2019115791和wo2020058495、wo2017009473、wo2019129178、wo2020018580、wo2020170254和wo2020219959中公開了其他抗cd45抗體和抗體-基部分。這些和其他抗cd45部分可以在本公開的背景下使用。
技術實現思路
1、本公開涉及對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包含：包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:7的lcdr1區、seq?id?no:8的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變重鏈，其中人源化抗體或抗體片段包含以下突變中的至少一種：
2、a)lcdr1區(seq?id?no:7)中的甘氨酸被丙氨酸替換，
3、b)lcdr1區(seq?id?no:7)中的第二個天冬酰胺被賴氨酸替換，
4、c)lcdr2區(seq?id?no:8)中的精氨酸被亮氨酸替換，或
5、d)lcdr2區(seq?id?no:8)中的苯丙氨酸被丙氨酸替換。
6、在某些實施方式中，本公開涉及一種對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包含：包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seqid?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:7的lcdr1區、seq?id?no:8的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變重鏈，其中人源化抗體或抗體片段包含以下突變中的至少一種：
7、a)lcdr1區(seq?id?no:7)中的甘氨酸被丙氨酸替換，
8、b)lcdr1區(seq?id?no:7)中的第二個天冬酰胺被賴氨酸替換，或
9、c)lcdr2區(seq?id?no:8)中的精氨酸被亮氨酸替換。
10、本公開還涉及對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包含：
11、a)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:75的lcdr1區、seq?id?no:96的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，
12、b)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:106的lcdr1區、seq?id?no:8的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，
13、c)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:108的lcdr1區、seq?id?no:96的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，
14、d)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:110的lcdr1區、seq?id?no:96的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，
15、e)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:106的lcdr1區、seq?id?no:96的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，
16、f)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:106的lcdr1區、seq?id?no:93的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈，或
17、g)包含seq?id?no:4的hcdr1區、seq?id?no:5的hcdr2區、seq?id?no:6的hcdr3區的可變重鏈，以及包含seq?id?no:108的lcdr1區、seq?id?no:93的lcdr2區和seq?id?no:9的lcdr3區的可變輕鏈。
18、本公開還涉及前述對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段還包含可變輕鏈的框架區4的三重甘氨酸基序的第二個甘氨酸向谷氨酰胺的突變。
19、本公開還涉及對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中人源化抗體或抗體片段包含：
20、a)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:98的可變輕鏈，
21、b)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:99的可變輕鏈，
22、c)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:101的可變輕鏈，
23、d)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:102的可變輕鏈，
24、e)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:103的可變輕鏈，
25、f)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:104的可變輕鏈，或
26、g)seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:105的可變輕鏈。
27、本公開還涉及前述對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中人源化抗體或抗體片段包含突變：
28、a)lcdr1區(seq?id?no:7)中的甘氨酸被丙氨酸替換，
29、b)lcdr1區(seq?id?no:7)中的第二個天冬酰胺被賴氨酸替換，和
30、c)lcdr2區(seq?id?no:8)中的精氨酸被亮氨酸替換。
31、本公開還涉及對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述人源化抗體或抗體片段包含seq?id?no:21的可變重鏈和seq?id?no:104的可變輕鏈。
32、本公開還涉及前述對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述人源化抗體包含fc區中的修飾，優選地其中所述fc修飾是沉默突變，更優選地其中所述突變是pa-lala、pg-lala或aeass突變。
33、本公開還涉及前述對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段，其中所述人源化抗體或抗體片段是單克隆抗體或抗體片段。
34、本公開還涉及一種抗體藥物綴合物，其包含前述對人類cd45特異的人源化抗體或抗體片段以及細胞毒性藥物。優選地，所述細胞毒性部分是吡咯并苯并二氮雜(pbd)。更優選地，所述吡咯并苯并二氮雜是特西林(tesirine)。
35、本公開還涉及前述人源化抗體、抗體片段和包含人源化抗體或抗體片段的抗體藥物綴合物，用于醫藥中。
36、本公開還涉及前述人源化抗體、抗體片段和包含人源化抗體或抗體片段的抗體藥物綴合物，用于治療血液癌癥，諸如白血病、骨髓瘤或淋巴瘤。
37、本公開還涉及前述人源化抗體、抗體片段和包含人源化抗體或抗體片段的抗體藥物綴合物，用于治療炎癥或自身免疫性疾病，諸如多發性硬化癥、系統性硬化癥、系統性紅斑狼瘡、克羅恩氏病、1型糖尿病、類風濕性關節炎或特發性關節炎。
38、本公開還涉及包含一個核酸序列或多個核酸序列的核酸組合物，所述一個核酸序列或多個核酸序列編碼前述人源化抗體和抗體片段。本公開還涉及包含所述核酸組合物的載體。本公開還涉及包含所述載體或核酸組合物的宿主細胞。
39、本公開還涉及藥物組合物，其包含前述人源化抗體、抗體片段或包含人源化抗體或抗體片段的抗體藥物綴合物以及藥學上可接受的載體或賦形劑。