背景技術：
1、基于抗體的治療劑已經成功地用于治療各種疾病，包含癌癥。正在探索的日益普遍的途徑是共接合兩種不同抗原的單一免疫球蛋白分子的工程化。接合兩種不同抗原的此類替代性抗體形式通常稱為雙特異性抗體。因為抗體可變區(fv)的相當大的多樣性使得可以產生識別幾乎任何分子的fv，所以產生雙特異性抗體的典型方法是將新的可變區引入到抗體中。
2、雙特異性抗體的特別有用的方法是使接合cd3的第一結合結構域和接合與癌細胞相關或在癌細胞上上調的抗原的第二結合結構域工程化，使得雙特異性抗體重定向cd3+t細胞以破壞癌細胞。先前已經報道，胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)在腎細胞癌中高表達，而在正常組織中最低地表達。有鑒于此，據信抗enpp3抗體可用于例如將抗腫瘤治療劑(例如，化學治療劑和t細胞)定位至此類表達enpp3的腫瘤。本文提供了能夠將cd3+效應t細胞定位至表達enpp3的腫瘤的針對cd3和enpp3的新穎雙特異性抗體。
技術實現思路
1、因此，本文提供了enpp3抗原結合結構域和抗enpp3抗體(例如，雙特異性抗體)。
2、在一個方面中，本文提供了一種組合物，所述組合物包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域包含以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域的可變重鏈互補決定區1-3(vhcdr1-3)和可變輕鏈互補決定區(vlcdr1-3)：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。在一些實施方式中，所述vhcdr1-3和所述vlcdr1-3選自圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i中提供的enpp3結合結構域的vhcdr1-3序列和vlcdr1-3序列。
3、在另一方面中，本文提供了一種組合物，所述組合物包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域包含以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha16-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha16-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
4、在另一方面中，本發明提供了一種組合物，所述組合物包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域選自以下enpp3結合結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
5、在另一方面中，本發明提供了一種核酸組合物，所述核酸組合物包含：a)第一核酸，所述第一核酸編碼可變重鏈結構域，所述可變重鏈結構域包含enpp3結合結構域的可變重鏈互補決定區1-3(vhcdr1-3)；以及b)第二核酸，所述第二核酸編碼可變輕鏈結構域，所述可變輕鏈結構域包含enpp3結合結構域的可變輕鏈互補決定區1-3(vlcdr1-3)，其中所述enpp3結合結構域是以下enpp3結合結構域中的一種enpp3結合結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha16-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。在一些實施方式中，所述vhcdr1-3和所述vlcdr1-3選自圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i中提供的vhcdr1-3序列和vlcdr1-3序列。
6、在另一方面中，本發明提供了一種核酸組合物，所述核酸組合物包含：a)第一核酸，所述第一核酸編碼可變重鏈結構域，所述可變重鏈結構域包含enpp3結合結構域的可變重鏈結構域；以及b)第二核酸，所述第二核酸編碼可變輕鏈結構域，所述可變輕鏈結構域包含enpp3結合結構域的可變輕鏈結構域，其中所述enpp3結合結構域是以下enpp3結合結構域中的任何一種enpp3結合結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
7、在一些實施方式中，本發明提供了一種表達載體組合物，所述表達載體組合物包含：a)第一表達載體，所述第一表達載體包含第一核酸；b)第二表達載體，所述第二表達載體包含第二核酸。在其它實施方式中，本發明提供了一種包含表達載體組合物的宿主細胞。
8、在一些實施方式中，本發明提供了一種制備胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域的方法，所述方法包括在表達enpp3結合結構域的條件下培養宿主細胞，以及回收enpp3結合結構域。
9、在另一方面中，本發明提供了一種抗enpp3抗體，所述抗enpp3抗體包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域包含以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域的可變重鏈互補決定區1-3(vhcdr1-3)和可變輕鏈互補決定區(vlcdr1-3)：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。在一些實施方式中，vhcdr1-3和vlcdr1-3選自圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i中的以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3。
10、在另一方面中，本發明提供了一種抗enpp3抗體，所述抗enpp3抗體包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域包含以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
11、在另一方面中，本文提供了一種抗enpp3抗體，所述抗enpp3抗體包含胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族成員3(enpp3)結合結構域，所述enpp3結合結構域選自以下enpp3結合結構域中的任何一種enpp3結合結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
12、在一些實施方式中，所述抗體包含：a)第一單體，所述第一單體包含第一抗原結合結構域和第一恒定結構域；以及b)第二單體，所述第二單體包含第二抗原結合結構域和第二恒定結構域，其中所述第一抗原結合結構域或第二抗原結合結構域中的任一者是enpp3結合結構域。在其它實施方式中，所述第一抗原結合結構域和所述第二抗原結合結構域與不同的抗原結合。在其它實施方式中，所述第一抗原結合結構域是enpp3結合結構域，并且所述第二抗原結合結構域是cd3結合結構域。在其它實施方式中，cd3結合結構域包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。在其它實施方式中，所述cd3結合結構域的所述vhcdr1-3和所述vlcdr1-3選自圖10a至圖10f中的vhcdr1-3和vlcdr1-3。
13、在一些實施方式中，所述cd3結合結構域包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。
14、在一些實施方式中，cd3結合結構域是抗cd3?scfv。
15、在一些實施方式中，其中所述第一恒定結構域和所述第二恒定結構域各自包含ch2-ch3。
16、在一些實施方式中，所述第一恒定結構域和所述第二恒定結構域各自包含ch1-鉸鏈-ch2-ch3。
17、在一些實施方式中，所述第一恒定結構域和所述第二恒定結構域各自是變體恒定結構域。
18、在一些實施方式中，第一單體和第二單體包括一組異二聚化變體，所述一組異二聚化變體是圖1a至圖1e中描繪的變體中的任何一種變體。在一些實施方式中，所述一組異二聚化變體包括以下一組變體中的一種變體：s364k/e357q:l368d/k370s；s364k:l368d/k370s；s364k:l368e/k370s；d401k:t411e/k360e/q362e；和t366w:t366s/l368a/y407v。
19、在一些實施方式中，所述第一單體和所述第二單體各自進一步包含消融變體。在其它實施方式中，所述消融變體是e233p/l234v/l235a/g236del/s267k。
20、在一些實施方式中，所述第一單體或所述第二單體中的至少一個單體進一步包含pi變體。在一些實施方式中，所述pi變體是n208d/q295e/n384d/q418e/n421d。在一些實施方式中，所述scfv包含帶電荷的scfv接頭。
21、在一些實施方式中，本發明提供了一種核酸組合物，所述核酸組合物包含編碼抗enpp3的核酸。在一些實施方式中，所述組合物包含編碼第一單體和第二單體的核酸。在一些實施方式中，本發明提供了包括核酸的表達載體。在一些實施方式中，本發明提供了一種用表達載體轉化的宿主細胞。
22、在一些實施方式中，本發明提供了一種制備根據權利要求b1至b21中任一項所述的抗enpp3抗體的方法。所述方法包括在表達抗enpp3抗體的條件下培養根據權利要求b25所述的宿主細胞，以及回收所述抗enpp3抗體。在一些實施方式中，本發明提供了一種治療癌癥的方法，所述方法包括向有需要的患者施用抗體。
23、在另一方面中，本發明提供了一種異二聚抗體，所述異二聚抗體包含：a)第一單體，所述第一單體包含：i)抗cd3scfv，所述抗cd3scfv包含第一可變輕鏈結構域、scfv接頭和第一可變重鏈結構域；以及ii)第一fc結構域，其中使用結構域接頭將scfv共價附接至第一fc結構域的n末端；b)第二單體，所述第二單體包含vh2-ch1-鉸鏈-ch2-ch3單體，其中vh是第二可變重鏈結構域并且ch2-ch3是第二fc結構域；以及c)輕鏈，所述輕鏈包含第二可變輕鏈結構域，其中所述第二可變重鏈結構域和所述第二可變輕鏈結構域形成enpp3結合結構域。
24、在一些實施方式中，enpp3結合結構域包含以下enpp3結合結構域的任何enpp3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
25、在一些實施方式中，enpp3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3選自圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i中提供的enpp3結合結構域的vhcdr1-3序列和vlcdr1-3序列。
26、在一些實施方式中，第二重鏈可變結構域包含重鏈可變結構域，并且第二輕鏈可變結構域包含以下enpp3結合結構域中任何enpp3結合結構域的可變輕鏈結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha16-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
27、在一些實施方式中，抗cd3?scfv包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。
28、在一些實施方式中，抗cd3?scfv的vhcdr1-3和vlcdr1-3選自圖10a至圖10f中的vhcdr1-3和vlcdr1-3。
29、在一些實施方式中，所述抗cd3?scfv包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。
30、在一些實施方式中，所述第一可變輕鏈結構域使用結構域接頭共價附接至所述第一fc結構域的n末端。
31、在一些實施方式中，所述第一可變重鏈結構域使用結構域接頭共價附接至所述第一fc結構域的n末端。
32、在一些實施方式中，所述scfv接頭是帶電荷的scfv接頭。
33、在一些實施方式中，第一fc結構域和第二fc結構域是變體fc結構域。
34、在一些實施方式中，第一單體和第二單體包括選自圖1a至圖1e中的異二聚化變體中的任何異二聚化變體的一組異二聚化變體。在一些實施方式中，所述一組異二聚化變體選自以下：s364k/e357q:l368d/k370s；s364k:l368d/k370s；s364k:l368e/k370s；d401k:t411e/k360e/q362e；和t366w:t366s/l368a/y407v，其中所述編號是根據eu編號進行的。
35、在一些實施方式中，所述第一單體和所述第二單體進一步包含消融變體。在一些實施方式中，所述消融變體是e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中所述編號是根據eu編號進行的。
36、在一些實施方式中，第一單體或第二單體中的一者包括pi變體。
37、在一些實施方式中，所述pi變體是n208d/q295e/n384d/q418e/n421d，其中所述編號是根據eu編號進行的。
38、在一些實施方式中，第一單體包含氨基酸變體s364k/e357q/e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中第二單體包含氨基酸變體l368d/k370s/n208d/q295e/n384d/q418e/n421d/e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，并且其中編號是根據eu編號進行的。
39、在一些實施方式中，所述scfv接頭是具有氨基酸序列(gkpgs)4的帶電荷scfv接頭。
40、在一些實施方式中，第一單體和第二單體各自進一步包括氨基酸變體428/434s。
41、在一些實施方式中，異二聚抗體包含以下異二聚抗體：xenp24804、xenp26820、xenp28287、xenp28925、xenp29516、xenp30262、xenp26821、xenp29436、xenp28390、xenp29463、和xenp30263。
42、在另一方面中，本發明提供了一種異二聚抗體，所述異二聚抗體包含：a)第一單體，所述第一單體從n末端到c末端包含scfv-接頭-ch2-ch3，其中scfv是抗cd3?scfv并且ch2-ch3是第一fc結構域；b)第二單體，所述第二單體從n末端到c末端包含vh-ch1-鉸鏈-ch2-ch3，其中ch2-ch3是第二fc結構域；以及c)輕鏈，所述輕鏈包含vl-cl；其中所述第一變體fc結構域包含氨基酸變體s364k/e357q，其中所述第二變體fc結構域包含氨基酸變體l368d/k370s，其中所述第一變體fc結構域和第二變體fc結構域各自包含氨基酸變體e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中第二單體的鉸鏈-ch2-ch3包含氨基酸變體n208d/q295e/n384d/q418e/n421d，其中vh和vl形成enpp3結合結構域，所述enpp3結合結構域包含選自以下的enpp3結合結構域的分別可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)，其中抗cd3?scfv包含選自以下的cd3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)，并且其中編號是根據eu編號進行的。
43、在一些實施方式中，所述scfv包含具有氨基酸序列(gkpgs)4的帶電荷scfv接頭。
44、在一些實施方式中，所述第一變體fc結構域和所述第二變體fc結構域各自進一步包含氨基酸變體428/434s，其中編號是根據eu編號進行的。
45、在一些實施方式中，本發明提供了一種核酸組合物，所述核酸組合物包含編碼抗體的第一單體和第二單體以及輕鏈的核酸。
46、在一些實施方式中，本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包含核酸。在一些實施方式中，本發明提供了一種用表達載體轉化的宿主細胞。
47、在一些實施方式中，本發明提供了一種治療enpp3相關癌癥的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文提供的抗體中的任何一種抗體。
48、在另一方面中，本發明提供了一種異二聚抗體，所述異二聚抗體包含：a)第一單體，所述第一單體從n末端到c末端包含vh1-ch1-接頭1-scfv-接頭2-ch2-ch3，其中vh1是第一可變重鏈結構域，scfv是抗cd3?scfv，接頭1和接頭2分別是第一結構域接頭和第二結構域接頭，并且ch2-ch3是第一fc結構域；b)第二單體，所述第二單體從n末端到c末端包含vh2-ch1-鉸鏈-ch2-ch3，其中vh2是第二可變重鏈結構域并且ch2-ch3是第二fc結構域；以及c)共同輕鏈，所述共同輕鏈包含可變輕鏈結構域；其中所述第一可變重鏈結構域和所述可變輕鏈結構域形成第一enpp3結合結構域，并且第二可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域形成第二enpp3結合結構域。
49、在一些實施方式中，第一enpp3結合結構域和第二enpp3結合結構域各自包含以下enpp3結合結構域的任何enpp3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha16-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha16-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
50、在一些實施方式中，所述第一enpp3結合結構域和第二enpp3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3選自圖14和圖45中提供的vhcdr1-3和vlcdr1-3。
51、在一些實施方式中，第一可變重鏈結構域和第二可變重鏈結構域各自包含enpp3結合結構域的可變重鏈結構域，并且第一可變輕鏈結構域和第二可變輕鏈結構域各自包含enpp3結合結構域的可變輕鏈結構域，其中enpp3結合結構域是以下enpp3結合結構域中的任何enpp3結合結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)。
52、在一些實施方式中，scfv包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的vhcdr1-3和vlcdr1-3：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。
53、在一些實施方式中，scfv的vhcdr1-3和vlcdr1-3選自圖10a至圖10f中的vhcdr1-3和vlcdr1-3。
54、在一些實施方式中，所述scfv包含以下cd3結合結構域中的任何cd3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)。
55、在一些實施方式中，所述scfv包含scfv可變重鏈結構域、scfv可變輕鏈結構域，以及連接所述scfv可變重鏈結構域和所述scfv可變輕鏈結構域的scfv接頭。
56、在一些實施方式中，所述scfv可變重鏈結構域使用所述第一結構域接頭附接至所述第一單體的所述ch1的c末端，并且所述scfv可變輕鏈結構域使用所述第二結構域接頭共價附接至所述第一fc結構域的n末端。
57、在一些實施方式中，所述scfv可變輕鏈結構域使用所述第一結構域接頭附接至所述第一單體的所述ch1的c末端，并且所述scfv可變重鏈結構域使用所述第二結構域接頭共價附接至所述第一fc結構域的n末端。
58、在一些實施方式中，所述scfv接頭是帶電荷的scfv接頭。
59、在一些實施方式中，第一fc結構域和第二fc結構域是變體fc結構域。
60、在一些實施方式中，所述第一單體和所述第二單體包含選自由圖1a至圖1e中所描繪的異二聚化變體的一組異二聚化變體。
61、在一些實施方式中，所述一組異二聚化變體選自以下：s364k/e357q:l368d/k370s；s364k:l368d/k370s；s364k:l368e/k370s；d401k:t411e/k360e/q362e；和t366w:t366s/l368a/y407v，其中所述編號是根據eu編號進行的。
62、在一些實施方式中，所述第一單體和所述第二單體進一步包含消融變體。
63、在一些實施方式中，所述消融變體是e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中所述編號是根據eu編號進行的。
64、在一些實施方式中，所述第一單體或所述第二單體中的一者進一步包含pi變體。
65、在一些實施方式中，所述pi變體是n208d/q295e/n384d/q418e/n421d，其中所述編號是根據eu編號進行的。
66、在一些實施方式中，第一變體fc結構域包含氨基酸變體s364k/e357q/e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中第二變體fc結構域包含氨基酸變體l368d/k370s/n208d/q295e/n384d/q418e/n421d/e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中編號是根據eu編號進行的。
67、在一些實施方式中，所述scfv接頭是具有氨基酸序列(gkpgs)4的帶電荷scfv接頭。
68、在一些實施方式中，所述第一變體fc結構域和所述第二變體fc結構域各自進一步包含氨基酸變體428/434s，其中編號是根據eu編號進行的。
69、在一些實施方式中，異二聚抗體包括以下異二聚抗體：xenp29437、xenp29520、xenp30264、xenp26822、xenp28438、xenp29438、xenp29467、xenp30469、xenp30470、xenp30819、xenp30821、xenp31148、xenp31149、xenp31150、xenp31419、和xenp31471。
70、在另一方面中，所述異二聚抗體包含：a)第一單體，所述第一單體從n末端到c末端包含vh1-ch1-接頭1-scfv-接頭2-ch2-ch3，其中scfv是抗cd3?scfv并且ch2-ch3是第一fc結構域；b)第二單體，所述第二單體從n末端到c末端包含vh1-ch1-鉸鏈-ch2-ch3，其中ch2-ch3是第二fc結構域；以及c)共用輕鏈，所述共用輕鏈包含vl-cl；其中所述第一變體fc結構域包含氨基酸變體s364k/e357q，其中所述第二變體fc結構域包含氨基酸變體l368d/k370s，其中所述第一變體fc結構域和第二變體fc結構域各自包含氨基酸變體e233p/l234v/l235a/g236del/s267k，其中第二單體的鉸鏈-ch2-ch3包含氨基酸變體n208d/q295e/n384d/q418e/n421d，其中所述vh和vl包含選自以下的enpp3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：an1[enpp3]h1l1、an1[enpp3]h1?l1.33、an1[enpp3]h1?l1.77、an1[enpp3]h1.8?l1、an1[enpp3]h1.8?l1.33、an1[enpp3]h1l1.77、h16-7.213、h16-9.69、h16-1.52、ha16-1(1)23、h16-9.44、h16-1.67、ha1?6-1(3,5)36、h16-1.86、h16-9.10、h16-9.33、h16-1.68、ha16-1(1)1、ha1?6-1(3,5)18、ha16-1(2,4)4、ha16-1(3,5)56、h16-7.8、h16-1.93、ha1?6-1(3,5)27.1、h16-1.61、h16-1(3,5)5、h16-7.200、h16-1(3,5)42、h1?6-9.65、ha1-1(3,5)19、和ha16-1.80(圖12、圖13a至圖13b、和圖14a至圖14i)，其中抗cd3scfv包含選自以下的cd3結合結構域的可變重鏈結構域和可變輕鏈結構域：h1.30_l1.47、h1.32_l1.47、h1.89_l1.47、h1.90_l1.47、h1.33_l1.47、h1.31_l1.47、l1.47_h1.30、l1.47_h1.30、l1.47_h1.32、l1.47_h1.89、l1.47_h1.90、l1.47_h1.33、和l1.47_h1.31(圖10a至圖10f)，并且其中編號是根據eu編號進行的。
71、在一些實施方式中，所述scfv包含具有氨基酸序列(gkpgs)4的帶電荷scfv接頭。
72、在一些實施方式中，第一變體fc結構域和第二變體fc結構域各自進一步包含氨基酸變體428/434s。
73、在一些實施方式中，第一單體和第二單體以及抗體的共同輕鏈。在一些實施方式中，本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包含核酸。在一些實施方式中，本發明提供了一種用表達載體轉化的宿主細胞。在一些實施方式中，本發明提供了治療enpp3相關癌癥的方法，所述方法包括向有需要的患者施用抗體。
74、在另一方面中，本發明提供了一種異二聚抗體，所述異二聚抗體包括以下異二聚抗體：xenp24804、xenp26820、xenp28287、xenp28925、xenp29516、xenp30262、xenp26821、xenp29436、xenp28390、xenp29463、和xenp30263。
75、在另一個方面中，本發明提供了一種異二聚抗體，所述異二聚抗體包括下列異二聚抗體：xenp29437、xenp29520、xenp30264、xenp26822、xenp28438、xenp29438、xenp29467、xenp30469、xenp30470、xenp30819、xenp30821、xenp31148、xenp31149、xenp31150、xenp31419、和xenp31471。在一些實施方式中，本發明提供了包含編碼異二聚抗體的核酸的核酸組合物。在一些實施方式中，本發明提供了一種表達載體，所述表達載體包含核酸。在一些實施方式中，本發明提供了一種用表達載體轉化的宿主細胞。
76、在一些實施方式中，本發明方法提供了一種治療enpp3相關癌癥的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本文提供的異二聚抗體中的任何一種異二聚抗體。