本發(fā)明涉及生物，尤其涉及一種思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
1、思茅松，為松科松屬常綠喬木，基于生長速度快、材質(zhì)好、適應(yīng)性強(qiáng)和產(chǎn)脂量高等特點(diǎn)，思茅松已經(jīng)成為我國重要的林木資源，在木材、紙漿、松脂等多個(gè)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。思茅松的育種和生長周期較長，常規(guī)育種方法不能滿足當(dāng)前的遺傳改良和種質(zhì)創(chuàng)新需求，因此需要借助無性繁殖技術(shù)實(shí)現(xiàn)思茅松的大規(guī)模繁育，加快育種進(jìn)程。體細(xì)胞胚胎發(fā)生(體胚發(fā)生)是一種極具潛力的無性繁殖方式，具有周期短、再生率高、遺傳穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。體胚發(fā)生主要包含胚性愈傷組織的誘導(dǎo)、增殖、體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)和成熟以及體細(xì)胞胚的萌發(fā)再生四個(gè)階段，其中胚性愈傷組織的誘導(dǎo)是體胚發(fā)生的關(guān)鍵前提。
2、目前，思茅松胚性愈傷組織誘導(dǎo)的研究較少，而目前現(xiàn)有的松樹進(jìn)行胚性愈傷組織誘導(dǎo)時(shí)均選用合子胚為外植體，但選用合子胚進(jìn)行誘導(dǎo)，難以發(fā)揮單倍體育種的優(yōu)勢，阻礙了松樹育種進(jìn)程；且合子胚在遺傳上相對單一，長期使用不利于松樹優(yōu)良品種的選育和遺傳改良。思茅松的花藥攜帶的遺傳物質(zhì)具有多樣性，通過花藥誘導(dǎo)愈傷組織能拓寬遺傳背景，挖掘更多優(yōu)良性狀。但目前卻沒有利用思茅松的花藥進(jìn)行胚性愈傷組織誘導(dǎo)的研究，這使得花藥外植體的脫毒方法也處于空白狀態(tài)。
3、因此，亟需研究一種利用思茅松的花藥進(jìn)行胚性愈傷組織誘導(dǎo)的方法，來克服現(xiàn)有的思茅松無性繁殖的缺陷。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為克服相關(guān)技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，該方法采用思茅松花藥進(jìn)行思茅松的外植體培育，花藥作為植物的生殖器官，遺傳信息穩(wěn)定，有助于保持思茅松的優(yōu)良性狀；選用思茅松花藥作為育種材料可盡早實(shí)現(xiàn)后代的穩(wěn)定分離，提高選擇的可靠性和準(zhǔn)確性；另外，花粉誘導(dǎo)出的愈傷組織可以保持母本的優(yōu)良性狀，對后續(xù)優(yōu)株擴(kuò)繁具有重要意義。
2、一種思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，包括：
3、采集思茅松雄花，并對所采集的雄花進(jìn)行表面消毒處理；
4、將表面消毒后的思茅松雄花放入脫毒溶液中浸泡，進(jìn)行脫毒處理；
5、清洗脫毒后的思茅松花雄花外植體，并吸干水分；
6、取出吸干水分后的思茅松外植體，分離出外植體的花藥并將花藥置于培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出愈傷組織。
7、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述采集思茅松雄花，包括：
8、于晴天采集思茅松未散粉的幼嫩雄花作為外植體；
9、并用濕透的報(bào)紙包裹思茅松雄花，以對外植體進(jìn)行保存。
10、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述將表面消毒后的思茅松雄花放入脫毒溶液中浸泡，進(jìn)行脫毒處理，包括：
11、將思茅松雄花放入酒精浸泡30s-60s，然后將思茅松雄花轉(zhuǎn)入升汞溶液浸泡5min-20min；
12、其中所述脫毒溶液包括濃度為0.1％的升汞溶液或濃度為0.3％的升汞溶液或濃度為10％的次氯酸鈉溶液中的任意一種。
13、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述對所采集的雄花進(jìn)行表面消毒處理，還包括：
14、將思茅松雄花放在組配瓶內(nèi)，在瓶口蓋上一層紗布并綁緊，在自來水下沖洗1小時(shí)，用濃度為1％的pvp-k30溶液浸泡1小時(shí)，無菌水清洗2遍。
15、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述清洗脫毒后的思茅松花雄花外植體，并吸干水分，包括：
16、將升汞溶液浸泡后的花藥取出；
17、用無菌水清洗4-6次，然后用無菌濾紙吸干水分。
18、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述將花藥置于培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出愈傷組織，包括：
19、分離思茅松花藥，將分離后的花藥接種于培養(yǎng)基中；
20、在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出愈傷組織；
21、其中培養(yǎng)室的溫度為25±2℃；濕度為65％-75％，
22、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，
23、所述培養(yǎng)基包括dcr培養(yǎng)基，且dcr培養(yǎng)基中還具有以下添加成分：2,4-d、tdz、6-ba(6-芐氨基嘌呤)、kt(呋喃甲氨基嘌呤)、瓊脂；
24、其中每升dcr培養(yǎng)基中，添加2,4-d0.2mg-0.4mg、添加tdz0.4mg-0.7mg、添加6-ba0.3mg-0.5mg、添加kt0.5g-1g、添加瓊脂7.0g-8.0g。
25、在本發(fā)明較佳的技術(shù)方案中，所述對思茅松雄花進(jìn)行脫毒處理，包括：
26、將外植體浸泡在含有抗病毒劑和抗菌劑的混合溶液中進(jìn)行脫毒；
27、其中，抗病毒劑為病毒唑、病毒靈中的任意一種，抗菌劑為青霉素、鏈霉素中的任意一種。
28、本發(fā)明還提供一種思茅松的愈傷組織的培養(yǎng)系統(tǒng)，該系統(tǒng)用于實(shí)施如上所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法。
29、本發(fā)明的有益效果為：
30、本發(fā)明提供的一種思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，該方法包括：采集思茅松雄花，并對所采集的雄花進(jìn)行表面消毒處理；將表面消毒后的思茅松雄花放入脫毒溶液中浸泡，進(jìn)行脫毒處理；清洗脫毒后的思茅松花雄花外植體，并吸干水分；取出吸干水分后的思茅松外植體，分離出外植體的花藥并將花藥置于培養(yǎng)基內(nèi)暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)出愈傷組織。該方法采用思茅松花藥進(jìn)行思茅松的外植體培育，花藥作為植物的生殖器官，遺傳信息穩(wěn)定，有助于保持思茅松的優(yōu)良性狀，且具有純合倍性的特點(diǎn)。選用思茅松花藥作為育種材料可盡早實(shí)現(xiàn)后代的穩(wěn)定分離，提高選擇的可靠性和準(zhǔn)確性。另外，花粉誘導(dǎo)出的愈傷組織可以保持母本的優(yōu)良性狀，對后續(xù)優(yōu)株擴(kuò)繁具有積極意義。
1.一種思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于：