本公開涉及體外診斷免疫檢測領(lǐng)域，特別涉及一種堿性磷酸酶促化學(xué)發(fā)光底物液及化學(xué)發(fā)光檢測方法。
背景技術(shù)：
1、化學(xué)發(fā)光是指在發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的過程中，特定物質(zhì)吸收部分化學(xué)能達到激發(fā)態(tài)，在回到基態(tài)的過程中釋放的能量以光子的形式釋放出來，從而產(chǎn)生發(fā)光的現(xiàn)象。化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence?immunoassay，clia)是指將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合，用于檢測抗原、抗體、激素、脂肪酸、維生素和藥物等的分析技術(shù)。化學(xué)發(fā)光免疫分析法既有化學(xué)發(fā)光的高靈敏性，又有酶聯(lián)免疫反應(yīng)的操作簡單、反應(yīng)快速的特點，易于標準化實驗操作，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷。
2、當前的免疫分析檢測中，有些被測物在臨床樣本中濃度差異大，甚至可跨越105～106的數(shù)量級。目前一般采用對高濃度樣本先進行稀釋再測試的方法，存在測試周期長，測試成本高，稀釋干擾大，操作繁瑣等弊端。
3、因此，對這樣的臨床檢測項目的檢測方法存在進一步改進的需求。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本公開的目的在于提供一種具有寬線性的化學(xué)發(fā)光底物液以及化學(xué)發(fā)光檢測方法。
2、為此，本公開第一方面提供一種化學(xué)發(fā)光底物液，包括化學(xué)發(fā)光底物、熒光素和水溶性高分子季銨鹽，其中所述化學(xué)發(fā)光底物選自氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物。
3、根據(jù)一些實施方式，所述氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物為adp-star和cdp-star。
4、根據(jù)一些實施方式，所述水溶性高分子季銨鹽選自含聚乙烯基的季銨鹽。優(yōu)選地，所述水溶性高分子季銨鹽選自聚乙烯基芐基-三甲基氯化銨、聚乙烯基芐基-芐基二甲基氯化銨和聚乙烯基芐基-三丁基氯化銨中的至少一種。
5、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在3萬以上，優(yōu)選5萬以上。
6、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測下限小于或等于3000光子數(shù)/秒，線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。
7、根據(jù)一些較佳的實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測下限為1000～3000光子數(shù)/秒，優(yōu)選為1000～2000光子數(shù)/秒；所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測上限為100m～200m光子數(shù)/秒，優(yōu)選為120m～200m光子數(shù)/秒。
8、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括50-500mg/l的化學(xué)發(fā)光底物，30-500mg/l的熒光素和1-10g/l的水溶性高分子季銨鹽。
9、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括150-250mg/l的化學(xué)發(fā)光底物，150-250mg/l的熒光素和3-7g/l的水溶性高分子季銨鹽。
10、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液進一步包括緩沖劑和防腐劑。
11、根據(jù)一些實施方式，所述緩沖劑選自tris-hcl、amp-hcl、ampd-hcl、dea-hcl、ches-hcl、硼酸-naoh、甘氨酸-naoh緩沖體系中的至少一種。優(yōu)選地，所述緩沖劑選自amp-hcl緩沖體系。
12、根據(jù)一些實施方式，所述防腐劑選自疊氮化鈉、proclin系列、山梨酸鉀、苯甲酸鈉中的至少一種。
13、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液通過堿性磷酸酶催化而化學(xué)發(fā)光。
14、根據(jù)一些實施方式，所述堿性磷酸酶濃度低至10-19mol/l。
15、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液用于檢測待測樣本中人絨毛促性腺素hcg。
16、根據(jù)一些實施方式，所述待測樣本中的所述人絨毛促性腺素hcg的濃度范圍為1～200000miu/ml。優(yōu)選，所述待測樣本是血液樣本。
17、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液用于用雙抗體夾心法檢測所述待測樣本中人絨毛促性腺素hcg。
18、根據(jù)一些實施方式，所述雙抗體夾心法中使用包被有hcg抗體的超順磁性微粒作為捕獲試劑，使用堿性磷酸酶標記的hcg抗體作為標記物。
19、根據(jù)本公開的第二方面，提供一種化學(xué)發(fā)光檢測方法，包括以下步驟：
20、將待測樣本與檢測試劑混合，所述檢測試劑中包括能與待測物結(jié)合的捕獲試劑和堿性磷酸酶標記物，從而得到堿性磷酸酶標記的免疫復(fù)合物；
21、將所述堿性磷酸酶標記的免疫復(fù)合物與以上第一方面中任意實施方式所述的化學(xué)發(fā)光底物液混合，從而得到混合液；
22、測定所述混合液的光信號，并基于所述光信號獲得所述待測樣本中的待測物的分析結(jié)果。
23、根據(jù)本公開的第三方面，提供一種化學(xué)發(fā)光檢測方法，包括以下步驟：
24、將待測樣本與檢測試劑混合，所述檢測試劑中包括能與待測物結(jié)合的捕獲試劑和堿性磷酸酶標記物，從而得到堿性磷酸酶標記的免疫復(fù)合物；
25、將所述堿性磷酸酶標記的免疫復(fù)合物與化學(xué)發(fā)光底物液混合，從而得到混合液；
26、測定所述混合液的光信號，并基于所述光信號獲得所述待測樣本的分析結(jié)果，
27、其中，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括化學(xué)發(fā)光底物、熒光劑和表面活性劑，
28、其中，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在3萬以上，或者，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測下限小于或等于2000光子數(shù)/秒，線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。
29、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在5萬以上，或者，所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測下限為1000～3000光子數(shù)/秒，優(yōu)選為1000～2000光子數(shù)/秒；所述化學(xué)發(fā)光底物液的線性檢測上限為100m～200m光子數(shù)/秒，優(yōu)選為120m～200m光子數(shù)/秒。
30、根據(jù)一些實施方式，所述測定混合液的光信號包括用光度計測定所述混合液的光信號，所述光度計的線性檢測下限小于或等于2000光子數(shù)/秒，所述光度計的線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。
31、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物為二氧雜環(huán)丁烷類化合物。優(yōu)選地，二氧雜環(huán)丁烷類化合物選自氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物，所述熒光劑選自熒光素和/或羧基取代的熒光素，所述表面活性劑選自水溶性高分子季銨鹽類表面活性劑。
32、根據(jù)一些較佳實施方式，所述氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物為adp-star和cdp-star；所述羧基取代的熒光素為5-羧基熒光素、6-羧基熒光素和5(6)-羧基熒光素。
33、根據(jù)一些較佳實施方式，所述水溶性高分子季銨鹽是含聚乙烯基的季銨鹽，優(yōu)選聚乙烯基芐基-三甲基氯化銨、聚乙烯基芐基-芐基二甲基氯化銨和聚乙烯基芐基-三丁基氯化銨中的至少一種。
34、根據(jù)一些實施方式，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括50-500mg/l的化學(xué)發(fā)光底物，30-500mg/l的熒光劑和1-10g/l的水溶性高分子季銨鹽。優(yōu)選地，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括150-250mg/l的化學(xué)發(fā)光底物，150-250mg/l的熒光劑和3-7g/l的水溶性高分子季銨鹽。
35、根據(jù)一些實施方式，在上述方法中，所述待測物為人絨毛促性腺素hcg。優(yōu)選地，所述待測樣本中hcg的濃度范圍為1～200000miu/ml。更優(yōu)選地，所述方法為雙抗體夾心法。尤其優(yōu)選地，所述捕獲試劑為包被有hcg抗體的超順磁性微粒。
36、本公開的化學(xué)發(fā)光底物液通過化學(xué)發(fā)光底物、熒光劑和表面活性劑的組合，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測上限與檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值達5萬以上，在較佳的實施方式中甚至可達6萬以上的寬線性，從而可利用諸如堿性磷酸酶的酶促發(fā)光免疫檢測體系實現(xiàn)對低濃度樣本和高濃度樣本的準確檢測，而無需先識別樣本中被測物濃度是否超過檢測限，再進行稀釋，簡化了檢測步驟，提高了檢測效率。