本發(fā)明屬于生物檢測，涉及檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關(guān)系鑒定中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、現(xiàn)有技術(shù)記載了在法醫(yī)物證學領(lǐng)域，主要通過檢測生物檢材的遺傳標記實現(xiàn)個體識別和親權(quán)鑒定目的，其中主要采用短串聯(lián)重復序列(str)遺傳標記進行檢測分析。
2、據(jù)文獻記載，str遺傳標記散布在整個人類基因組中，其多態(tài)性高、長度適中且便于檢測，是目前法醫(yī)應(yīng)用最為廣泛的遺傳標記。經(jīng)過多年的發(fā)展，常染色體和y染色體的str遺傳標記無論在數(shù)量還是可應(yīng)用的檢測試劑盒上都已經(jīng)十分豐富。相比，x染色體的str遺傳標記(x-str)研究較少。
3、研究文獻還記載，女性的一條x染色體能隨機失活形成barr小體，雖然基因表達沉默但在有絲分裂和減數(shù)分裂時期能與未失活的x染色體發(fā)生同源重組。男性個體的x-str以單倍型的形式傳遞給女兒，女性中兩條x染色體在減數(shù)分裂時同源重組，隨機傳遞兩個等位基因中的一個給子女。在同一條染色體上，相近的兩個x-str更容易以單倍型的形式向下遺傳，導致兩個遺傳標記連鎖不平衡，形成比較緊密的連鎖群。因此，x-str的同一染色體定位及其特殊的遺傳規(guī)律，在司法實踐中應(yīng)用較少。
4、目前，在實踐使用的x-str檢測試劑盒中，一些基因座的連鎖關(guān)系不甚清晰，或者使用的連鎖群較少。x染色體上較公認的連鎖群僅有4個，這也導致其在鑒定中的效能較低。因此，業(yè)內(nèi)認為，使用較多的連鎖群，將是提高x-str檢測分析效能的重要手段。
5、基于現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)與現(xiàn)狀，本技術(shù)的發(fā)明人擬提供一種新的檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關(guān)系鑒定中的應(yīng)用。本發(fā)明檢測試劑盒能提高鑒定效能和準確性，適用于法醫(yī)學個體識別以及特殊的親緣關(guān)系鑒定，具有良好的法醫(yī)學應(yīng)用前景。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于基于現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)與現(xiàn)狀，提供一種新的檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關(guān)系鑒定中的應(yīng)用。
2、本發(fā)明提供了一個可以檢測7連鎖群含21個x-str遺傳標記的復合擴增檢測體系，可適用于法醫(yī)學個體識別和女性參與的親緣關(guān)系鑒定。
3、本發(fā)明篩選了3個新連鎖群上的x-str遺傳標記，根據(jù)已有的4個連鎖群上的遺傳標記，經(jīng)過對遺傳標記的分析，選出21個x-str基因座建立了檢測試劑盒，并具有很高的鑒定效能，命名為fx-21rplex。
4、具體的，本發(fā)明從現(xiàn)有的7個連鎖群中，根據(jù)遺傳標記的多態(tài)性、遺傳連鎖的緊密程度等，篩選獲得21個x-str，包括dxs10135、dxs8378、dxf02、dxf07、dxf08、dxf09、dxs10079、dxf13、dxs10074、dxs10075、dxf15、dxs6803、dxf18、dxf28、dxf29、dxs10103、hprtb、dxs10101、dxs10146、dxs10134、dxs7423。具體信息如下表1所示：
5、表1x-str名稱、連鎖群及染色體定位、物理位置
6、
7、
8、作為進一步的優(yōu)選方案，21個x-str的引物及使用濃度如下：
9、表2?21個x-str基因座的引物對序列和擴增反應(yīng)終濃度
10、
11、
12、作為進一步的優(yōu)選方案，21個x-str分為4組，每對引物中的一條分別使用相應(yīng)顏色的熒光染料進行標記，具體如下：
13、表3四組x-str熒光標記分布情況
14、 熒光標記 x-str分組 5-fam dxs10103、dxf02、dxf15、dxf13、dxf28和dxf29 hex dxf09、dxs10146、dxf18和dxs10134 trama dxs6803、dxf07、dxs10075、dxs10074、hprtb和dxs8378 rox dxs7423、dxs10079、dxs10101、dxf08和dxs10135
15、作為進一步的優(yōu)選方案，擴增體系的條件如表4和表5所示。
16、表4復合擴增體系推薦的組分
17、 組分 體積 2×multiplexpcrmastermix 12.5μl 5×引物混合物 5μl 模板dna 0.1-5ng 4mg/mlbsa 1μl ddh2o 補足至25μl
18、表5復合擴增體系推薦pcr擴增條件
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20、
21、本發(fā)明中，人類基因組dna來源包括血液/血痕、精液/精斑、唾液斑、汗液、組織、毛發(fā)、骨骼及人類的其他組織和體液。
22、進一步，本發(fā)明提供了一種在個體識別中的應(yīng)用。
23、進一步，本發(fā)明提供了一種在親緣關(guān)系鑒定中的應(yīng)用。
24、本發(fā)明中，檢測體系具有良好的擴增特異性，每個基因座的峰高均衡；經(jīng)種屬特異性試驗驗證結(jié)果表明，所述檢測體系具有很高的特異性。
25、本發(fā)明中，進行了dna檢測比對研究：
26、以dna標準品9947a作為模板，分別使用argusx-12和fx-21rplex進行x-str分型，結(jié)果表明，兩個試劑盒重疊的位點，分型均一致；
27、使用同一個體來源的血卡和唾液拭子，剪取并使用chelex100抽提dna，作為模板進行x-str分型，結(jié)果表明，兩類檢材分型結(jié)果一致，表明對常規(guī)的生物檢材具有良好的分型效果。
28、本發(fā)明中，進行了親緣關(guān)系分析：
29、使用一對母子的血卡，使用chelex100抽提dna，分別進行x-str分型，結(jié)果表明，母子間在每個x-str基因座上均有一個相同的等位基因。
30、本發(fā)明提供了一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒。本發(fā)明的檢測試劑盒中使用7個連鎖群，克服了現(xiàn)有技術(shù)中基因座的連鎖關(guān)系不甚清晰，或者使用的連鎖群較少，x染色體上公認的連鎖群少導致其在鑒定中的效能較低的缺陷。本發(fā)明檢測試劑盒能提高鑒定效能和準確性，適用于法醫(yī)學個體識別以及特殊的親緣關(guān)系鑒定，具有良好的法醫(yī)學應(yīng)用前景。