本發(fā)明涉及中藥分析領(lǐng)域，具體而言，涉及一種水龍骨的指紋圖譜的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、水龍骨(polypodium?vulgare?l.)，為水龍骨科多足蕨屬植物歐亞水龍骨，其根莖部分具有藥用價值。水龍骨藥材的化學(xué)成分復(fù)雜，主要含有植物甾酮、酚酸、萜類、對-香豆酸衍生物等化學(xué)成分。其中，對-香豆酸衍生物具有多種生物活性，如抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)痛、抑菌、解熱、抗腫瘤、抗氧化、抗真菌、抗血小板聚集、抗凝血、拮抗雄激素、改善性功能等；β-蛻皮甾酮對淋巴細(xì)胞和免疫細(xì)胞有促進(jìn)作用，具有很強(qiáng)的藥理活性，能增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，改善機(jī)體代謝，抗炎，抑制腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，提高機(jī)體抗病能力等。另外，該植物與同屬蕨類植物石韋的主要化學(xué)成分組成存在一定不同，石韋中含有三萜、黃酮、口山酮類化合物，關(guān)于水龍骨中的具體化學(xué)成分的報道較少。
2、由于水龍骨藥材的化學(xué)成分類型多，分離和純化難度大，目前對水龍骨藥材的質(zhì)量控制方法鮮有報道。尋找其質(zhì)量控制的指標(biāo)，挖掘質(zhì)量控制的方法，能夠進(jìn)一步保證水龍骨藥材的質(zhì)量，促進(jìn)其進(jìn)一步開發(fā)和利用。因此，本申請欲提供一種水龍骨藥材的質(zhì)量控制方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的主要目的在于提供一種水龍骨的指紋圖譜的構(gòu)建方法及其應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中缺少對水龍骨進(jìn)行質(zhì)量控制的方法的問題。
2、為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供了一種水龍骨的指紋圖譜的構(gòu)建方法，構(gòu)建方法包括：s1，以對-香豆酸-4-o-β-d-吡喃葡萄糖苷和β-蛻皮甾酮為溶質(zhì)分別于溶劑中溶解，得到第一參照物溶液和第二參照物溶液；s2，將水龍骨的粉末與甲醇水溶液混合，依次進(jìn)行超聲、冷卻和過濾處理，得到供試品溶液；s3，將第一參照物溶液、第二參照物溶液和供試品溶液置于高效液相色譜儀中，進(jìn)行高效液相色譜檢測，得到第一參照物溶液、第二參照物溶液和供試品溶液的高效液相色譜圖。
3、進(jìn)一步地，第一參照物溶液中的對-香豆酸-4-o-β-d-吡喃葡萄糖苷的濃度為10-50μg/ml；優(yōu)選地，第二參照物溶液中的β-蛻皮甾酮的濃度為50-100μg/ml。
4、進(jìn)一步地，在s1中利用的溶劑包括：甲醇水溶液；優(yōu)選地，甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為80-100％。
5、進(jìn)一步地，在s2中，進(jìn)行超聲的時間為30-60min；在s2中，經(jīng)冷卻后的溫度為15-25℃；在s2中，過濾包括：利用0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行過濾；在s2中，甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為50-100％。
6、進(jìn)一步地，高效液相色譜儀的色譜條件包括：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以0.1-0.4％(v/v)無機(jī)酸的水溶液為流動相b，流速為0.8-1.0ml/min，柱溫為25-35℃，檢測波長250-280nm，進(jìn)行梯度洗脫；
7、洗脫條件為：0-10min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為15％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)為85％；10-40min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由15％上升至20％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由85％下降至80％；40-55min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由20％上升至30％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由80％下降至70％；55-60min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由30％上升至35％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由70％下降65％；60-75min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由35％上升至50％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由65％下降至50％；75-90min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由50％上升至70％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由50％下降至30％；90-100min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由70％上升至80％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由30％下降至20％；100-101min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由80％下降至15％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由20％上升至85％；100-110min，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為15％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)為85％。
8、進(jìn)一步地，無機(jī)酸包括磷酸。
9、進(jìn)一步地，構(gòu)建方法還包括：將第一參照物溶液、第二參照物溶液和供試品溶液的高效液相色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)分析，得到水龍骨的指紋圖譜。
10、為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，提供了一種水龍骨的質(zhì)量檢測方法，質(zhì)量檢測方法包括：利用上述的水龍骨的指紋圖譜的構(gòu)建方法，對待測水龍骨樣品進(jìn)行指紋圖譜的構(gòu)建，得到待測水龍骨樣品的指紋圖譜；將得到的待測水龍骨樣品的指紋圖譜與在相同指紋圖譜構(gòu)建條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行相似度比較，完成對待測水龍骨樣品的質(zhì)量檢測。
11、進(jìn)一步地，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有峰為14個；其中，2號峰為對-香豆酸-4-o-β-d-吡喃葡萄糖苷的峰，12號峰為β-蛻皮甾酮的峰。
12、進(jìn)一步地，以12號峰為定位峰，相對保留時間為1.000；其他11個共有峰的平均相對保留時間為：1號峰平均相對保留時間為0.080±0.01；2號峰平均相對保留時間為0.277±0.03；3號峰平均相對保留時間為0.304±0.03；4號峰平均相對保留時間為0.357±0.04；5號峰平均相對保留時間為0.419±0.04；6號峰平均相對保留時間為0.443±0.04；7號峰平均相對保留時間為0.560±0.06；8號峰平均相對保留時間為0.588±0.06；9號峰平均相對保留時間為0.687±0.07；10號峰平均相對保留時間為0.777±0.08；11號峰平均相對保留時間為0.991±0.10；13號峰平均相對保留時間為1.286±0.13；14號峰平均相對保留時間為1.301±0.13。
13、應(yīng)用本發(fā)明的技術(shù)方案，利用對-香豆酸-4-o-β-d-吡喃葡萄糖苷和β-蛻皮甾酮為指示物，建立了水龍骨的高效液相指紋圖譜，能夠?qū)崿F(xiàn)對水龍骨中多種化學(xué)成分的檢測。上述指紋圖譜的構(gòu)建方法簡單，獲得的指紋圖譜穩(wěn)定、可靠，精確度高、重復(fù)性好，能夠?qū)崿F(xiàn)對水龍骨藥材進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、全面的質(zhì)量控制。
1.一種水龍骨的指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述第一參照物溶液中的所述對-香豆酸-4-o-β-d-吡喃葡萄糖苷的濃度為10-50μg/ml；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在所述s1中利用的所述溶劑包括：甲醇水溶液；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在所述s2中，進(jìn)行所述超聲的時間為30-60min；
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀的色譜條件包括：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述無機(jī)酸包括磷酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法還包括：將所述第一參照物溶液、所述第二參照物溶液和所述供試品溶液的高效液相色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)分析，得到所述水龍骨的指紋圖譜。
8.一種水龍骨的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述質(zhì)量檢測方法包括：
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有峰為14個；
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，以所述12號峰為定位峰，相對保留時間為1.000；