本發(fā)明涉及抗體，具體地，涉及一種抗cd45抗體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、cd45（白細胞共同抗原，leukocyte?common?antigen）是免疫系統(tǒng)中至關(guān)重要的跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，廣泛表達于所有有核白細胞表面，包括t細胞、b細胞、自然殺傷細胞（nk細胞）、巨噬細胞和樹突狀細胞等。作為免疫細胞信號傳導的核心調(diào)控分子，cd45介導淋巴細胞的免疫應(yīng)答，在免疫細胞發(fā)育、活化、分化和耐受中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其結(jié)構(gòu)多樣性、功能復雜性及與疾病的關(guān)聯(lián)使其成為免疫學研究和臨床轉(zhuǎn)化的重要靶點。
2、在功能上，cd45通過去磷酸化src家族激酶（如lck和fyn）c端的抑制性酪氨酸殘基（如lck的tyr505），解除其自抑制狀態(tài)，從而激活下游信號通路。這一過程對t細胞受體（tcr）和b細胞受體（bcr）介導的免疫應(yīng)答至關(guān)重要，調(diào)控t/b細胞的活化、增殖及分化。此外，cd45參與胸腺細胞的陽性與陰性選擇，影響t細胞成熟，并在細胞因子產(chǎn)生和免疫應(yīng)答強度調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用。研究表明，cd45缺陷會導致嚴重的免疫功能障礙，而其在自身免疫疾病和白血病中的異常表達也提示其作為潛在診斷標志或治療靶點的重要性。cd45的功能具有環(huán)境依賴性，可能通過不同異構(gòu)體或相互作用分子展現(xiàn)出復雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。因此，開發(fā)cd45抗體對于免疫學研究和臨床診斷都有重要的意義。
3、目前，商業(yè)化cd45抗體存在顯著局限性，主流產(chǎn)品依賴傳統(tǒng)小鼠雜交瘤技術(shù)，生產(chǎn)工藝受限于動物源性體系（如腹水制備），存在批次間差異大、動物倫理爭議及潛在免疫原性等風險。因此，亟需通過創(chuàng)新開發(fā)策略（如非動物源重組技術(shù)、單b細胞測序技術(shù)）突破技術(shù)壁壘，縮短研發(fā)時間，篩選高親和力、高特異性及低批間差異的cd45抗體。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題至少之一。
2、因此，在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種抗體或其抗原結(jié)合片段。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有seq?id?no:1所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)cdr1；具有seq?id?no:2所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)cdr2；具有seq?id?no:3所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)cdr3；具有seq?id?no:4所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)cdr1；具有seq?id?no:5所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)cdr2；和具有seq?id?no:6所示的氨基酸序列或其保守修飾形式的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)cdr3。根據(jù)本發(fā)明實施方案的抗體或其抗原結(jié)合片段是通過單b細胞測序與非動物源重組技術(shù)，開發(fā)出的高親和力（pm級）的兔重組抗體，該抗體能夠高效并特異性的識別cd45，有效檢測cd45并診斷與cd45異常表達有相關(guān)性的疾病。
3、在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種核酸分子。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述核酸分子編碼前述的抗體或其抗原結(jié)合片段。根據(jù)本發(fā)明實施方案的核酸分子所編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段能夠高效并特異性的識別cd45，對cd45進行檢測，例如進行ihc檢測，還可以有效檢測cd45并診斷與cd45異常表達有相關(guān)性的疾病。
4、在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種表達載體。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，表達載體攜帶前述的核酸分子。由此，有效實現(xiàn)前述的抗體或其抗原結(jié)合片段的表達，進而實現(xiàn)抗體或其抗原結(jié)合片段的體外大量獲得。
5、在本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種重組細胞。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述重組細胞包括：攜帶前述的核酸分子或表達載體或表達前述的抗體或其抗原結(jié)合片段。利用該重組細胞在適合條件下，能夠在細胞內(nèi)有效地表達前述的抗體或其抗原結(jié)合片段。
6、在本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種制備第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述方法包括培養(yǎng)第四方面所述的重組細胞。
7、在本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明提出了一種抗體偶聯(lián)物。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述抗體偶聯(lián)物包含：前述的抗體或其抗原結(jié)合片段；以及與其偶聯(lián)的偶聯(lián)部分，所述偶聯(lián)部分與所述抗體或其抗原結(jié)合片段相連。本發(fā)明的抗體偶聯(lián)物可特異性的識別cd45，對cd45進行檢測，例如進行ihc檢測，還可以有效檢測cd45并診斷與cd45異常表達有相關(guān)性的疾病。
8、在本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明提出了一種試劑或試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述試劑或試劑盒包括：前述的抗體或其抗原結(jié)合片段或前述的抗體偶聯(lián)物。本發(fā)明的試劑盒能夠與cd45進行特異性結(jié)合，可有效檢測cd45。
9、在本發(fā)明的第八方面，本發(fā)明提出了前述的抗體或其抗原結(jié)合片段、前述的抗體偶聯(lián)物或試劑或試劑盒在檢測cd45、制備檢測cd45的產(chǎn)品或診斷cd45相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的用途。如前所述，根據(jù)本發(fā)明實施方案的抗體或其抗原結(jié)合片段是通過單b細胞測序與非動物源重組技術(shù)，開發(fā)出的高親和力（pm級）的兔重組抗體，該抗體可以有效的對cd45進行檢測，例如進行ihc檢測。
10、在本發(fā)明的第九方面，本發(fā)明提出了一種檢測測試樣品中cd45的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述方法包括將前面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、抗體偶聯(lián)物或試劑或試劑盒與待檢測樣本中的cd45抗原接觸，形成免疫復合物。
11、本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
1.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，包括
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，包括重鏈框架區(qū)和/或輕鏈框架區(qū)，所述重鏈框架區(qū)和/或輕鏈框架區(qū)的至少一部分來自于兔源抗體、鼠源抗體、人源抗體、靈長目源抗體、羊源抗體、狗源抗體、貓源抗體和羊駝源抗體中的至少之一。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，包括：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述抗體或其抗原結(jié)合片段進一步包括重鏈恒定區(qū)和/或輕鏈恒定區(qū)，所述重鏈恒定區(qū)和/或輕鏈恒定區(qū)的至少一部分來自于兔源抗體、鼠源抗體、人源抗體、靈長目源抗體、羊源抗體、狗源抗體、貓源抗體和羊駝源抗體中的至少之一。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述抗體包括選自全長單抗、fab抗體、fab’抗體、f（ab’）2抗體、fv抗體、單鏈抗體、單域抗體以及最小識別單位中的至少之一；或者，所述抗原結(jié)合片段包括選自f(ab’)2片段、fab’?片段、fab片段、f(ab)2片段、fv片段、scfv片段、scfv-fc融合蛋白、scfv-fv融合蛋白和最小識別單位中的至少之一。
7.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。
8.一種表達載體，其特征在于，包含權(quán)利要求7所述的核酸分子。
9.一種重組細胞，其特征在于，所述重組細胞包含權(quán)利要求7所述的核酸分子，權(quán)利要求8所述的表達載體或者表達權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。
10.一種制備權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其特征在于，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求9所述的重組細胞。
11.一種抗體偶聯(lián)物，其特征在于，所述抗體偶聯(lián)物包含權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段以及與其偶聯(lián)的偶聯(lián)部分。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的抗體偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)部分選自純化標簽或標記。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的抗體偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)部分包括選自膠體金、放射性標記、磷光化學劑、化學發(fā)光劑、熒光素、酶、天然毒素、核酸、多肽和親和標記物中的至少之一；和/或
14.一種試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒包含權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求11~13任一項所述的抗體偶聯(lián)物。
15.權(quán)利要求1~6任一所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求11~13任一項所述的抗體偶聯(lián)物或利要求14所述的試劑或試劑盒在檢測cd45、制備檢測cd45的產(chǎn)品或診斷cd45相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的用途。
16.一種檢測測試樣品中cd45的方法，其特征在于，所述方法包括將權(quán)利要求1~6任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求11~13任一項所述的抗體偶聯(lián)物或權(quán)利要求14所述的試劑或試劑盒與待檢測樣本中的cd45抗原接觸，形成免疫復合物。